李杨，赵午莉，司书毅，陈明华，邵荣光

    恶性肿瘤是威胁人类生命健康的重大慢性疾病，在所有恶性肿瘤中肺癌发病率和死亡率均居首位[1]。近年来，我国男性和女性肺癌发病率均呈快速上升趋势，而与大多数国家相比，中国的肺癌死亡率相对较高，占所有癌症死亡人数的近 20%[2]。预计 2015 - 2030年间，中国的肺癌死亡率可能增加约 40%[3]。肺癌的发病通常十分隐匿，临床确诊时往往已经进展至中晚期，患者生存期短。目前，对于肺癌的治疗多采用放疗、化疗、手术和分子靶向治疗等手段，但常伴有复发转移和耐药性等问题[4]。因此迫切需要寻找毒性小，疗效好的治疗药物。

    Secoemestrin C(Sec C)是从微生物发酵液中分离出来的具有抗肿瘤活性的多硫代二酮哌嗪类化合物。已有研究表明，Sec C 对胰腺癌及胰腺癌耐药细胞均具有明显的增殖抑制作用，可以通过内质网应激使内质网半胱氨酸残基硫酸化并降解Yes 相关蛋白(YAP)，引起胰腺癌细胞的凋亡[5]。但 Sec C 的抗肺腺癌活性还未被报道。本研究进一步探讨 Sec C 对于肺腺癌的增殖抑制作用及其作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 人肺腺癌细胞 A549、H1299 细胞由本实验室保存。

    1.1.2 实验试剂 细胞培养用 1640 培养基、胎牛血清均购自美国 Gibco 公司；10000 U/ml 青霉素、10000 μg/ml 链霉素、PBS 均购自中科迈晨科技有限公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Sigma-Aldrich 公司；4% 多聚甲醛固定液、结晶紫染液、SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5 ×)、细胞总蛋白的提取及定量所用的 RIPA 裂解液和 BCA试剂购自上海碧云天生物技术研究所；无水甲醇、DMSO 购自北京化工厂；Western blot 所用一抗购自美国 Cell Signaling Technology 公司；辣根过氧化物酶标记的二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司；发光液购自美国 Millipore 公司；5-乙炔基-2' 脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒购自广州锐博生物科技有限公司；N-乙酰半胱氨酸(NAC)购自美国 Selleck Chemical 公司；DAPI购自美国 Invitrogen 公司。

    1.1.3 实验仪器 倒置显微镜为日本 Olympus公司产品；酶标仪为美国BioTek 公司产品；化学发光检测仪为美国 SpectraMax 产品。

    1.2 方法 ......