梁凯歌，孙丹丹

    重组 III 型人源化胶原蛋白冻干纤维作为国内首个采用新型生物材料——重组人源化胶原蛋白制成的医疗器械，它的功能区具有 164.88° 柔性三螺旋结构，其氨基酸序列的重复单元与人类胶原的氨基酸序列特异性功能区一致，且生物相容性较好，其细胞的黏附性能优于人类 I、III 型胶原蛋白，与自然胶原有相似的性能和稳定性。与动物源性胶原相比，重组人源化胶原蛋白无病毒隐患、水溶性好、无排异反应，具有良好的修复性能，主要用于面部真皮组织填充以纠正额部动力性皱纹(包括眉间纹、额头纹和鱼尾纹)，预计在血管内皮、子宫内膜、创面、口腔黏膜修复及骨科等领域具有更广阔的临床应用。

    外源性 DNA 残留具有潜在的致癌风险，可能传递肿瘤或病毒相关基因，并导致癌变或其他病理变化，药品监督管理部门对外源性 DNA 残留量的要求非常严格[1]。重组 III 型人源化胶原蛋白冻干纤维在研发生产过程中可能会产生自身相关或工艺相关杂质以及外源污染物，因其广泛应用于人体，而外源性 DNA 进入人体后可能会导致基因突变，突变绝大多数会导致疾病，危害人体健康。因此，必须建立标准化外源性 DNA 残留检测方法，以满足对生物医药产品质量控制的要求。

    本研究利用实时荧光定量 PCR 技术对重组III 型人源化胶原蛋白冻干纤维中的外源性 DNA残留量进行测定，并对该方法的线性、重复性和回收率进行验证。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 样本 重组 III 型人源化胶原蛋白冻干纤维(批号：20201102、20201201、20201202、20210802、20210803、20210901、20210902、20210904，规格：4 mg/瓶)，由山西锦波生物医药股份有限公司提供。

    1.1.2 试剂 宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒 I、II(磁珠法)、E.coli残留 DNA 检测试剂盒(PCR 荧光探针法)及相应引物和探针均为天津科佰迪生物医药科技有限公司产品，引物和探针序列如下：正向引物：5' CGCTGTAAGAGGACCGTAG 3'，反向引物：5' GACCTCACGCAATCTTCTGA 3'；探针：5' FAM-ACCGCTGCCTCCTCCTGCAGGMGB 3' ......