宋阳，宋雪，杨生宝，张燕，刘建凯

    ·论著·

    不同胰蛋白酶在制备腮腺炎减毒活疫苗中的效果比较

    宋阳，宋雪，杨生宝，张燕，刘建凯

    102600 京民海生物科技有限公司/北京市新型联合疫苗工程技术研究中心

    比较基因重组胰蛋白酶和猪源胰蛋白酶在腮腺炎减毒活疫苗中的使用效果。使用浓度为 10%、15%、20% 基因重组胰蛋白酶制备鸡胚成纤维细胞，通过细胞密度、细胞活性、24 h 以及48 h 细胞贴壁状态等指标确定基因重组胰蛋白酶使用浓度；与猪源胰蛋白酶进行比较，通过细胞密度、细胞活性、48 h 细胞贴壁状态以及病毒滴度等指标比较两种胰蛋白酶的使用效果；使用基因重组胰蛋白酶制备 3 批腮腺炎减毒活疫苗，检定疫苗的稳定性；规模化放大验证该工艺的稳定性。通过研究发现基因重组胰蛋白酶的使用浓度为 15%；与猪源胰蛋白酶进行比较，两种胰酶制备的细胞密度水平一致，无显著性差异(> 0.05)，48 h 后细胞均生长至单层，细胞状态良好，按照同一 MOI 进行接毒，病毒滴度无显著性差异(> 0.05)；使用 CF-10 进行试验，病毒滴度也无差异(> 0.05)；连续 3 批使用基因重组胰蛋白酶制备的疫苗热稳定性良好，且该工艺可以规模化放大。在制备腮腺炎减毒活疫苗中可以使用浓度 15% 的基因重组胰蛋白酶替代猪源胰蛋白酶，作为鸡胚成纤维细胞消化液使用。

    基因重组胰蛋白酶； 猪源胰蛋白酶； 鸡胚成纤维细胞； 腮腺炎病毒

    流行性腮腺炎，是由腮腺炎病毒感染导致的急性呼吸道传染病，主要通过飞沫在空气中进行传播，其主要威胁儿童等免疫力较为低下的人群，被我国列为法定传染病之一，根据国家卫生健康委员会统计，我国在 2021 年共发生 119 955 例(人)的感染，给公共卫生和人民健康带来巨大威胁。

    接种腮腺炎减毒活疫苗是控制该病流行的重要手段[1]。目前我国使用的腮腺炎疫苗均为减毒活疫苗，在生产时需要将其弱毒株接种在细胞基质上。腮腺炎减毒活疫苗使用的细胞基质为鸡胚成纤维细胞，在制备该细胞时需要使用胰蛋白酶将鸡胚组织细胞消化[2]。目前在此工艺中使用的胰蛋白酶多为猪源胰蛋白酶。但是在疫苗制备过程中需要严格控制原料的来源与质量[3]，而目前仍有使用动物源性胰蛋白酶造成产品被外源因子污染的现象发生[4]。此外，猪源胰蛋白酶中杂质较多，杂质主要来源于胰腺的脂类、蛋白和核酸等，在胰蛋白酶处理细胞的过程中，杂质可能会影响细胞的生长[5]，是严重影响病毒复制和提高病毒滴度的重要因素之一，尤其在大规模工厂化生产时，会导致原材料损失和经济成本的增加[6-7] ......