薛芸，张静爽，周游，石锐

    ·论著·

    白藜芦醇对氧化应激刺激MC3T3-E1细胞增殖、衰老和成骨分化的影响

    薛芸，张静爽，周游，石锐

    100035 北京，北京市创伤骨科研究所/国家骨科医学中心/首都医科大学附属北京积水潭医院

    研究白藜芦醇对 H2O2诱导的衰老成骨细胞的细胞增殖和成骨分化作用的影响。不同浓度 H2O2处理 MC3T3-E1 细胞，采用 CCK8 实验检测细胞增殖活性；检测衰老相关 β-半乳糖苷酶活性，明确 H2O2诱导成骨细胞衰老合适浓度。不同浓度白藜芦醇处理 MC3T3-E1 细胞，采用 CCK8实验检测其对细胞增殖活性的影响；不同浓度白藜芦醇处理成骨诱导培养基诱导的成骨细胞，检测碱性磷酸酶(ALP)活性和成骨基因(Col1、Runx2、Ocn)表达；不同浓度白藜芦醇处理H2O2诱导的成骨细胞，检测 ALP 和 β-半乳糖苷酶活性。CCK8 检测结果显示，高浓度(200、400 μmol/L)H2O2显著抑制细胞增殖(1 材料和方法

    1.1 材料

    小鼠 MC3T3-E1 细胞购于武汉普诺赛生命科技有限公司；白藜芦醇购于美国 Sigma 公司；α-MEM 培养基购于美国 Hyclone 公司；胎牛血清和胰酶购于美国 Gibco公司；青霉素-链霉素-两性霉素 B 混合溶液(100 ×)购于北京索莱宝科技有限公司；CCK8 购于日本同仁公司；BCA 蛋白测定试剂盒购于美国 Thermo Fisher Scientific 公司；ALP/AKP 测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；细胞衰老特异性 β-半乳糖苷酶染色原位染色试剂盒购于杰美基因医药科技有限公司；cDNA 反转录试剂盒、RT-qPCR 试剂盒购于日本 Takara 公司；H2O2购于北京化工厂；二氧化碳培养箱购于美国 Thermo Fisher Scientific 公司；多功能酶标仪购于德国 Molecular Devices 公司；荧光显微镜购于日本奥林巴斯公司；RT-qPCR 检测仪器购于 Applied Biosystems 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 白藜芦醇配制 白藜芦醇用二甲基亚砜溶解，完全培养基(含体积分数 10% 胎牛血清)配制所需浓度。

    1.2.2 MC3T3-E1 培养 MC3T3-E1 细胞在37 ℃和 5% CO2条件下培养，使用含 5% FBS 的 α-MEM 培养液(100 U/ml 青霉素 G 和100 μg/ml 链霉素)进行培养 ......