赵丹华，杨立宏，刘欣玉，黄艳秋，吴小红，李玉华

    ·技术与方法·

    不同实验条件对新型冠状病毒疫苗临床血清IgG抗体检测结果的影响

    赵丹华，杨立宏，刘欣玉，黄艳秋，吴小红，李玉华

    102629 北京，中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室

    2019 年底，突如其来的新型冠状病毒疫情暴发，各国迅速从不同技术路线展开针对新型冠状病毒的疫苗研发，以期早日战胜病毒带来的威胁，恢复正常的生活秩序。目前已上市或正在研发的新型冠状病毒疫苗包括灭活疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗等，其中核酸疫苗是国际疫苗研发的新技术[1]。中国第一个进入临床试验的新型冠状病毒疫苗是军事医学科学院研发的重组腺病毒载体 COVID-19 疫苗(Ad5-nCoV)[2]。在免疫 28 d 后，对有症状新冠感染的有效性为 57.5%，对重症新冠感染的有效性为91.7%[3]。北京生物制品研究所、北京科兴中维生物技术有限公司和武汉生物制品研究所的新冠灭活疫苗先后在我国获得附条件审批上市，免疫 2 针后，疫苗接种者均产生高滴度抗体，保护效力分别为 79.34%、> 50% 和 72.51%[4-5]。2020 年辉瑞公司的 BNT162b2 和莫德纳公司的 mRNA-1273 mRNA 疫苗获批使用，两款疫苗均显示出超过 90% 的有效性，将 mRNA 疫苗的研究推向新高度[6]。2023 年 3 月石药集团新型冠状病毒 mRNA 疫苗(SYS6006)在中国纳入紧急使用，我国也迎来首款国产新型冠状病毒 mRNA 疫苗。安徽智飞龙科马生物制药公司的亚单位蛋白疫苗可调控机体合成高水平的中和抗体，是全球首个获批临床使用的新冠病毒重组亚单位蛋白疫苗[7]。

    对新型冠状病毒疫苗临床血清的评价主要包括 IgG 结合抗体、假病毒中和抗体和真病毒中和抗体，其中 IgG 结合抗体检测没有相应的标准品及标准方法，均为企业自研方法，用来评价疫苗免疫后抗体阳转率和抗体滴度水平。本研究筛选了几种可能影响 ELISA 检测结果的关键实验参数及实验条件，考察不同条件对新冠病毒疫苗临床血清的 IgG 结合抗体滴度检测结果是否会造成影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 样品 6 份新型冠状病毒 mRNA 疫苗(针对 RBD区域)临床人血清，1 份健康人血清作为阴性对照。

    1.1.2 试剂 Recombinant SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike S1-His Recombinant Protein (HPLC-verified) 和Recombinant SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike RBD-His Recombinant Protein 购自北京义翘神州科技股份有限公司；羊抗人 IgG HRP 购自美国 Southern Biotech 公司；PBS 和终止液购自北京索莱宝科技有限公司；Tween-20 和BSA购自美国 Sigma 公司；TMB 显色液购自美国 Surmodics 公司 ......