胡馨月，孙悦，李懿，吕萍，张慧，李晶，梁成罡

    目的 使用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF MS)对脂肪酸修饰型胰高血糖素-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽和司美格鲁肽一级结构进行测定。

    方法 分别在完整分子和酶切肽段水平上检测，采用ACQUITY UPLC peptide BEH C18(2.1 mm × 100 mm，30 nm，1.7 μm)色谱柱，流动相 A 为 0.1% 甲酸-水溶液，流动相 B 为 0.1% 甲酸-乙腈溶液，梯度洗脱，流速0.3 ml/min；采用正离子 ESI+ 离子源和 MSE 采集模式进行数据采集。

    结果 分别从完整分子和肽段水平准确测定了两种脂肪酸修饰型 GLP-1 类似物一级完整序列结构信息，并对修饰侧链位点进行准确定位。肽段覆盖率为 100%，且专属性强、重复性好。

    结论 液质联用技术快速、灵敏、准确，可用于 GLP-1 类似物一级结构的表征分析。

    胰高血糖素-1(glucagon like peptide-1，GLP-1)是由肠道 L 细胞分泌的促进胰岛素分泌的多肽激素，能够调节或刺激胰岛素的分泌，减慢胃肠道排空，抑制食欲[1]。生理性的 GLP-1 是亲水性多肽，几乎无法透过血脑屏障，在体内会被二肽基态酶(DPP-4)迅速灭活，半衰期很短，仅为 1～2 min[2]。随着重组 DNA 技术的发展，通过改变 GLP-1 天然结构，减缓药物的吸收和分布，延长体内半衰期，减少病人的给药次数。GLP-1 类似物具有改善血糖[3]、降低体重[4]和降低心血管风险[5]等功能。GLP-1 类似物的开发策略，主要分为 3 种：①改变氨基酸：通过改变第 8 位氨基酸，从而阻止DPP-4 的剪切；②通过引入脂肪酸链，提高药物与白蛋白的结合能力，延长在血浆中的存留时间，或者通过 GLP-1 与白蛋白或 Fc 等融合，依赖于 pH的 FcRn 介导的再循环机制，逃避内吞进入溶酶体降解，延长半衰期[6]，或与 PEG 共价结合，从而减缓肾消除；③通过皮下缓释剂型来维持血药浓度[7]。

    利拉鲁肽和司美格鲁肽是利用了以上第 1 和第 2 种策略。在结构方面，利拉鲁肽与天然 GLP-1(7～37)分子相比，34 位赖氨酸被精氨酸取代，26 位赖氨酸上增加一个谷氨酸介导的 16 碳棕榈酰脂肪酸侧链(图1A)[8-9]；司美格鲁肽与 GLP-1(7～37)相比有两个氨基酸的差异，除了 34 位赖氨酸被精氨酸取代外，8 位丙氨酸被非天然氨基酸2-氨基异丁酸(Aib)取代 ......