马婷婷，毕森盛，曹磊，印志琪，段可然，王政禄，郑虹

    目的 高质量的肝脏组织样本对肝脏疾病的研究至关重要，冷缺血时间(CIT)是影响组织样本质量的关键因素，探讨冷缺血时间与不同疾病类型肝组织样本质量的相关性，为获得高质量肝组织样本提供标准。

    方法 选取天津市第一中心医院进行手术治疗的肝癌(HCC)和胆道闭锁(BA)患者各 30 例，手术切除肝组织后，室温放置 0、0.25、0.5、1、2、3、5 和 6 h 后，分别从基因水平、蛋白水平及形态学水平对组织质量进行检测，提取总 RNA 及基因组 DNA，分别检测浓度、纯度及完整性(RIN/DIN 值)，荧光定量 PCR 检测组织样本冷缺血 0、6 h 后 ALB 基因表达水平；免疫组化方法检测组织样本冷缺血 0、6 h 后 HepPar1、CK19、CD34、Vimentin 蛋白表达情况，Western blot 检测组织样本冷缺血 0、6 h 后ALB 蛋白表达水平；HE 染色观察组织样本冷缺血 0、6 h后组织及细胞形态学变化。

    结果 DNA 产量、RNA 纯度和 RNA RIN 随时间变化，时间效应具有统计学意义。组间效应不显著，表明肝癌和胆道闭锁组间没有差异。DNA 产量和 RNA RIN 的交互效应有统计学意义，说明时间的影响随着组别不同而有所不同。与冷缺血 0 h 相比，肝癌、胆道闭锁组织样本冷缺血 6 h 后ALB 基因表达水平降低，差异具有统计学意义(P < 0.05)；免疫组化方法检测组织样本冷缺血 0、6 h 后 HepPar1、CK19、CD34、Vimentin 蛋白表达情况均无变化，Western blot检测显示组织样本冷缺血 0、6 h 后 ALB 蛋白表达水平无显著变化；石蜡切片 HE 染色显示样本冷缺血 0、6 h 后组织及细胞形态学无变化。

    结论 冷缺血时间对肝组织样本中核酸质量具有显著影响，缩短冷缺血时间可获得高质量肝组织样本。

    人体组织样本是临床诊断和科学研究中应用最为广泛的生物样本资源之一，选择科学的采集和保存方法，可确保组织样本的质量。基因水平、蛋白水平及组织形态学是医学研究、个性化和靶向治疗中的重要研究内容[1-2]。近年来，世界上建立了越来越多的疾病组织样本库[3-6]。样本质量是样本库的核心，做好质量控制与管理可以尽量减少样本质量的变化，保持样本原有性质。目前分析前因素或变量对样本质量影响较大，在分析组织样本中的蛋白质、RNA 和 DNA 等不稳定大分子时，冷缺血时间被普遍认为是重要分析前变量。大量研究发现 ......