白露，陈苗苗，王远芝，黄铭蕊，赵永新

    目的 建立基于紫外可见光谱检测抗体偶联药物(ADC)药物-抗体偶联比(DAR)的检测方法并进行验证。

    方法 使用盐酸胍作为变性剂，修正基于氨基酸组成推算的抗体在 280 nm 处消光系数。利用比尔-朗伯定律测定抗体和小分子药物在 252 nm 处的消光系数及小分子药物在280 nm 处的消光系数。确定基于紫外可见光谱检测 ADC的 DAR 公式参数和检测方法。根据《中华人民共和国药典》(2020)指导原则，对方法进行验证。

    结果 抗体在 252 nm 和 280 nm 处的摩尔消光系数分别为 91258 和 228913 L/(mol·cm)；tubulysin 衍生物小分子药物在 252 和 280 nm 处的摩尔消光系数分别为 12798和 3186 L/(mol·cm)。DAR =(A280-ADC × 91258 - A252-ADC ×228913)/(A252-ADC × 3186 - A280-ADC × 12798)。方法专属性符合要求。模拟 DAR 值为 1.881 ～ 15.045 的 ADC 药物进行准确性验证，回收率为 79.38% ～ 99.13%。重复性相对标准偏差(RSD%)为 1.93%，中间精密度 RSD% 为2.36%。以 252 nm 处吸光值与 280 nm 处吸光值的比值为纵坐标，以模拟 DAR 值为横坐标进行线性回归的方程为y = 0.0408x + 0.414，相关系数 r2 为 0.9954。根据 DAR 测定公式推算该方法的检测范围为 0.60 ～ 82.56。不同检测波长[(280 ± 1)或(252 ± 1)nm]、不同放置时间(0 ～ 60 min)、不同批次的比色皿条件下，DAR 值检测结果的 RSD% 均< 5.0%。

    结论 基于紫外可见光谱法进行抗体偶联药物 DAR 测定的方法简单、可操作性强，专属性、准确度、精密度、耐用性满足检测需求，该方法可以用于抗体偶联药物的质量分析和质量控制。

    自 Paul Ehrlich 百年前提出特异性杀伤癌细胞的“魔术子弹”概念，特别是近 40 年，伴随着单克隆抗体创新技术进步，单克隆抗体偶联药物(ADC)也日臻成熟和加速迭代发展[1]。由于结合了抗体的特异性和小分子药物的杀伤性，ADC 药物相比传统化疗或放疗疗法具有更高的疗效和更低的副作用。因此自 2000 年首款 ADC 药物上市以来，至今已经有 15 款 ADC 药物上市，尤其是在过去 5 年内有 10 款 ADC 药物获批上市 ......