杨柏峰，吕溪琳，吴丽洁，赵明，李世慧

    目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和 b 型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称 DTacP-sIPV-Hib)中多糖含量，并对方法进行验证。

    方法 在 1 ml 样品中加入 0.02 g 柠檬酸钠，振荡混匀后，置于 37 ℃ 保温 24 h，4000 × g 离心 5 min 收集上清液，稀释后加入 6 mol/L 盐酸，100 ℃ 下加热 2 h，冰浴 10 min后加入 0.8 ml 氢氧化钠(1 mol/L)溶液用于终止酸水解。采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法根据检测信号峰面积计算对应水解荚膜多糖(PRP)含量，通过 PRP 占多糖含量干重的 41.3% 计算出总的多糖含量。

    结果 核糖醇参考品浓度在 0.1 ～ 1.5 μg/ml 范围内标准曲线 r2 > 0.99，检测下限可达 10 ng/ml。核糖醇加标回收率均在 95% ～ 105%；对高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法检测多糖的重复性和中间精密度进行验证，相对标准偏差(RSD)均小于 5%，方法专属性和耐用性良好。

    结论 使用柠檬酸钠作为解吸附剂，与高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法相结合可用于 DTacP-sIPV-Hib 中 Hib多糖的含量检测，为产品的质量控制和稳定性研究提供参考。

    b 型流感嗜血杆菌(Hib)在五岁以下儿童中可引起严重的侵袭性感染，包括脑膜炎、肺炎、败血症和心包炎[1]。Hib 疫苗显著降低了与 Hib 疾病相关的儿童发病率和死亡率[2]。随着我国免疫规划的不断推进，儿童接种疫苗的种类和频率不断增加。为了简化免疫程序，提高疫苗接种的及时性，降低扩大免疫计划的实施成本，并为儿童提供更好的保护，开发和推广能够同时预防多种疾病的联合疫苗已成为新疫苗开发的一种趋势。联合疫苗的使用在简化免疫程序、提高及时接种率和接种者的依从性以及降低疫苗管理成本方面具有巨大优势，这是儿童疫苗计划的目标[3]。总之，联合疫苗的开发和应用已成为政府、制造商和研发机构关注的问题和优先事项。

    Hib 多糖蛋白结合物可以与不同的疫苗抗原结合，如白喉(D)、破伤风(T)、无细胞百日咳、乙型肝炎(Hep B)和脊髓灰质炎病毒(IPV)[4-5]，其与这些抗原中的任何一种以及佐剂、防腐剂和其他赋形剂的结合都可能会干扰对 Hib 疫苗关键质量属性的分析，如总糖或游离(未结合)多糖含量[6-7]。鉴于这类疫苗的复杂性，开发适宜的方法来跟踪这些成分在联合疫苗复杂基质中的含量变得越来越重要 ......