陈 冰

    (中国中医科学院中医基础理论研究所，北京市东直门内南小街 16号，100700)

    双向凝胶电泳技术自从问世以来便广泛应用于各种领域，现已成为蛋白质组学的核心技术，由于其整体性、实时性等特点，近年来大量应用于中医证候研究方面。本文拟对双向电泳技术在证候研究中的应用做一综述。

    1 双向电泳技术原理及应用

    双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)是根据蛋白质等电点和分子量的不同，通过两次方向互相垂直的高分辨率等电聚焦电泳和十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，将带不同净电荷和不同分子量的蛋白质二维平面上呈点状分开的技术。双向电泳技术 1975年由意大利生化学家O'Farrell发明[1]，可以在一个平面上分离出数以千计的蛋白质，适用于整体水平生命活动规律的研究[2]。它以高分辨率、简单、快速等优点被广泛应用于蛋白质组学研究，是目前分离复杂蛋白质组分最常用的工具。通过双向电泳得到差异蛋白后，可结合其他蛋白质组学研究方法进一步分析，如结合质谱技术进行差异蛋白质的鉴定、相关数据库检索，将所获结果进行生物信息学分析等。因此说，双向电泳是蛋白质组学的核心技术。

    双向电泳技术包括蛋白样品制备、等电聚焦、SDSPAGE、染色等步骤。样品制备非常关键，合理的样品制备可保证 2-DE的重复性。尽量减少蛋白提取过程中的降解和丢失，以提高分辨率。等点聚焦是在存在 p H梯度和电场的条件下，蛋白质分子向其净电荷为零的 p H处移动，当样本中的每一个蛋白质均达到其电荷为零的 pH位置时，样品蛋白质就根据其等电点得到分离。SDS-PAGE有垂直和水平 2种方式。垂直方式是目前常用的电泳方式，阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠同蛋白质合后形成项链样结构，并以 114∶1的比例结合，从而使蛋白质带有净负电荷，使蛋白电泳时移动距离与其分子量呈正比。

    双向电泳常用的染色方法有考染色、银染、荧光染色等方法。荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)是目前蛋白质组学研究的热门技术[3-4]。它是通过荧光染料与蛋白质中的赖氨酸残基进行结合，把不同荧光素标记的样品在同一块凝胶上进行分离，用不同波长的激光激发后可以显示不同的颜色 ......