刘 蓓 朱海燕 高永红 徐 冰 朱陵群 陈立新

    (1北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室，北京市东城区海运仓5号，100700;2北京师范大学中药资源与资源药物研究所;3北京中医药大学)

    机体在正常情况下，中性粒细胞与血管内皮细胞几乎不产生黏附作用，在前炎症因子刺激后，两者黏附增加，从而对血管内皮造成严重伤害。黄芪多糖是中药黄芪的主要活性物质，前期研究发现，黄芪多糖具有良好的免疫调节作用，并且对心肌缺血再灌注损伤引发的炎症级联反应具有一定的抑制作用[1]。本研究从基因转录水平观察黄芪多糖干预TNF-α诱导的HCEMC中P-选择素、E-选择素转录的影响，同时观察p38MAPK信号通路的变化，进一步探讨黄芪多糖干预内皮细胞炎症黏附作用的可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 原代人心脏微血管内皮细胞(Scien-Cell)，从人心肌组织中分离后立即冻存，用抗Ⅷ因子、抗CD31(P-CAM)抗体(免疫荧光法)和DiI-Ac-LDL摄取检测，均符合内皮细胞特性。

    1.1.2 主要药品及试剂 黄芪多糖(天津赛诺制药有限公司，批号:Z20040086)、多聚赖氨酸(Sigma)、95%乙醇(北京试剂公司);内皮细胞培养基(Scien-Cell);0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2～7.4)、虎红(Solarbio);TNF- α(10μg，Peprotech)、SV Total RNA分离纯化试剂盒、反转录试剂盒(Promega)、PCR Master Mix(ABI)。

    1.1.3 主要仪器 CO2恒温细胞培养箱(Sanyo);Mx3000P荧光定量PCR仪(Stratagene);倒置相差显微镜(Olympus IMT-2);超净工作台(CJT-E-11北京昌平长城空气净化工程公司);电热恒温水箱(HH.W21.420)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 人心脏微血管内皮细胞的培养 将细胞冻存管从液氮中取出立即于37℃恒温水浴箱中融化，注入预先用20mg/L多聚赖氨酸包被的75cm培养瓶中，使用内皮细胞培养基进行培养，放置于37℃、5%的CO2培养箱中，2～3天传代1次 ......