叶 晔 阮善明 沈敏鹤 宋巧玲 陈美雪 林 红 任函承

    (1中国计量学院，浙江省杭州市下沙经济开发区学源街，310018;2浙江省中医院)

    结肠癌(Colon Carcinoma)是一种常见的消化道肿瘤，其发病率居恶性肿瘤的第4位[1]。由于当前临床应用的结肠癌化疗方案均存在疗效差、缓解率低、毒副反应重和患者耐受性差等问题，ⅢC、IV期结肠癌五年生存率分别仅为44.3%和8.1%[2]，目前公认的治疗方法是以手术为主的综合治疗。近年来，中医药在结肠癌的辅助治疗中有较好的疗效，尤其是在化疗增敏减毒[3]，治疗结肠癌并发症[4-5]、控制症状[6]、延长疾病进展时间、生活质量[7]等方面均有显著疗效，但是目前国内外在对中医药在化疗期间介入时机的选择中，尚未有明确的方案。益元汤为浙江省中医院沈敏鹤主任医师在长期临证中总结改进的补益法验方，由黄芪、生晒参、猪苓、茯苓、枸杞子、女贞子等组成，我们通过建立人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植性肿瘤的实验模型，初步评价及探讨中医补益法优化协同化疗治疗结肠癌的有效性及作用机制。

    1 实验材料

    1.1 实验动物 Balb/c-nu裸鼠，雄性，体重22～24g，5～6周龄，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，实验动物使用许可证号:syxk(沪)2008-0058。饲养于浙江中医药大学动物实验中心无特定病原体动物(SPF)级环境下，室内定期进行紫外线照射，笼具、垫料、饮水、饲料等均严格消毒。

    1.2 药物与主要试剂 中医补益法方剂:采用益元汤，由生药材黄芪30g，生晒参30g，猪苓30g，茯苓30g，枸杞子15g，女贞子15g组成。先用10倍生药重量的蒸馏水浸泡1h，武火煎沸后改文火煎1h，用8层纱布过滤取出药汁，再加入8倍水，文火煎30min，过滤取汁，收集两次煎剂，弃去药渣，文火浓缩成1.25g/mL(200mL)，分装至无菌玻璃瓶内，并沸水浴内煮30min，冷却后4℃冰箱冷藏。化疗药选用5-Fu。细胞选用购于中国科学院细胞库的LoVo人结肠癌细胞系，主要细胞培养试剂有购自Gibco公司的胎牛血清(FBS)与F-12K培养基等。免疫组化试剂主要有购自Santa Curz公司的兔抗鼠Bcl-2抗体、Bax抗体与购自Diaclone公司的DAB染色试剂盒等。

    1.3 主要仪器 细胞培养实验仪器:Thermo公司的5%CO2培养箱HEPA class100，北京医用离心机厂的自动平衡离心机LDZ5-2，重庆光电公司的倒置显微镜等。动物实验仪器:手术剪、止血钳镊、眼科剪镊、注射器、小鼠灌胃器、游标卡尺等 ......