白 莉 张新光 吴 杰 朱慧华 赵毅涛 张晓峰 虞坚尔

    (1上海中医药大学附属市中医医院，上海市闸北区芷江中路274号，200071;2上海市中医药研究院中医儿科研究所;3上海中医药大学;4广东省中医院)

    支气管哮喘是由多种细胞，包括炎性细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞等)、气道结构细胞(气道平滑肌细胞和上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病[1]。近年来研究认为，辅助性T淋巴细胞两种亚型Th1/Th2的失衡是哮喘发病最重要的免疫学机制[2]。正常情况下，Thl和Th2细胞处于相对平衡状态，维持机体正常的细胞免疫和体液免疫功能。当机体受到异常抗原刺激时，上述这种平衡被打破，Thl、Th2发生偏向，即可导致与Thl和Th2型反应相关的一些变应性疾病的发生、发展[3]。平喘方既针对哮喘发病之本——伏痰夙瘀，又降气平喘治标，是治疗哮喘的一剂良方。本实验通过动态观察平喘方对支气管哮喘模型小鼠Thl/Th2上游因子T-bet/GATA-3 mRNA表达的影响，研究其对支气管哮喘发病过程作用环节的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级雄性BALB/c小鼠120只，4～6周龄，体重18～22g，由中科院上海实验动物中心提供。

    1.2 主要试剂与仪器 卵清白蛋白(Ovalbumins.OVA)购自上海伯奥生物科技有限公司;结晶氯化铝(AlCl3·6H2O)、氢氧化钠(NaOH)购自上海美兴化工有限公司;焦碳酸二乙酯(DEPC)购自上海生物工程技术公司;DEPC处理水购自上海赛百盛基因公司;TRIZOLTM购自联合生物集团公司;GATA-3及T-bet单克隆抗体购自美国Santa cruz公司。氯仿HPLC级购自上海试剂一厂;异丙醇HPLC级购自苏州振亚化工厂;无水乙醇AR级购自上海振兴化工一厂;FQPCR试剂盒购自上海达为科生物科技有限公司。压缩喷雾治疗仪(Eurosol Aerosol Apparatus)，意大利梅法;旋涡振荡器(Vortex)XW-80A，上海青浦泸西仪器厂;干式恒温器(K10CD)，杭州蓝焰科技有限公司;-80℃低温冰箱，日本三洋;-20℃冷藏冰箱，伊来克斯BDC-280e);低温冷冻离心机(1 15K3K15)，Sigma(美国);生物安全柜(TYPE B2)，Sigma(美国);紫外杀毒车(ZXC型)，上海跃进医用光学器械厂;Real-time检测仪(7300Sequence Detection System)ABI-7500，ABI(美国) ......