齐元富 李慧杰 李 静

    (1山东中医药大学附属医院，济南，250011;2山东中医药大学，济南，250355)

    Folkman早在1971年就提出了肿瘤发生发展具有血管依赖性的观点，研究肿瘤血管生长调节机制一度成为关注的焦点，而以抑制肿瘤血管生成为靶点阻断肿瘤生长及转移成为肿瘤防治的重要途径[1]。传统中成药六神丸作为中医学“攻毒治法”的代表方剂，其抗肿瘤的作用日益受到重视。本研究意在探讨六神丸对H22肝癌腹水移植瘤PDGF与VEGF表达的影响及其可能机制，以期为中医药抗肿瘤提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物 H22肝癌荷瘤小鼠(腹水型)，昆明小鼠，购自山东省医学科学院。

    1.2 主要药品及试剂 六神丸(苏州雷允上制药生产，批号 HA1001)，顺铂(齐鲁制药生产，批号04090291)。兔抗鼠VEGF多克隆抗体试剂盒(编号SA2252)，兔抗鼠PDGF单克隆抗体(编号BA1498)，SABC免疫组化试剂盒(兔IgG 1/2KIT，编号SA1065)，二氧基联苯胺浓缩显色液(编号AR1065)，均为博士德公司产品。

    1.3 主要仪器 高清晰度HP2AS-1000彩色病理图像分析系统。

    1.4 H22肝癌腹水移植瘤模型的建立 脱颈椎处死接种传代7d的H22肝癌荷瘤小鼠，无菌条件下取腹水于容器冰块保存。并留取部分腹水观察细胞形态及细胞计数，滴腹水于玻片涂片，瑞氏染色，镜下细胞分类计数，其中瘤细胞数应≥95%，并取0.9mL加0.1mL台盼蓝染色，细胞计数瘤细胞总数及死细胞数，活细胞记数>95%。将肝素管内细胞调整细胞浓度为1×107/mL备用 ......