阮善明 沈敏鹤 王 益 林 红 郑丽萍 李梦婷 张 恺

    (1 浙江中医药大学附属第一医院肿瘤中心，杭州，310006;2 浙江中医药大学，杭州，310053)

    本研究解毒法的代表方剂解毒三根汤源于本院70年代初期创制的解毒抗癌验方三根糖浆，其主要组成为虎杖根、藤梨根、水杨梅根，临床实践已经证明解毒三根汤治疗消化道肿瘤的有效性;同时以消化道一线化疗药5-FU 作为化疗法的代表[1-2]。本实验通过建立CT-26结肠癌细胞小鼠移植瘤模型，以解毒三根汤联合传统化疗药5-FU 从不同阶段干预实验模型，以抑瘤率、体重等为主要观察目的，评价中医解毒法联合化疗的优化治疗模式。同时，通过ELISA 法检测血清CEA、sCD44 含量，进一步探讨其治疗结肠癌的可能作用机制，现结果报道如下。

    1 实验材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验细胞 CT26结肠癌细胞系由浙江中医药大学提供。

    1.1.2 实验动物 SPF 级健康BALB/C 小鼠，60只，体重(18±2)g，6～8周龄，雄性。购自浙江中医药大学实验动物中心提供。

    1.1.3 实验药品 氟尿嘧啶粉剂购自上海源叶生物科技有限公司。解毒三根汤(藤梨根30 g、虎杖根30 g、水杨梅根30 g)，购自浙江省中医院中药房，按照原方比例配置成解毒法汤煎剂，过滤浓缩后每毫升含生药1.2 g。(藤梨根:产地浙江，批号:20101117;水杨梅根:产地浙江，批号:20101210;虎杖根:产地浙江，批号:20090302)。解毒三根汤水煎剂的制备:由生药材藤梨根500 g，水杨梅根500 g，虎杖根500 g，共1500 g。先用10 倍生药重量的蒸馏水浸泡半小时，武火煎沸后改文火煎半小时，用8 层纱布过滤取出药汁，再加入8倍水，文火煎半小时，过滤取汁，收集两次煎剂，弃去药渣，文火浓缩成1.2 g/mL，分装至无菌玻璃瓶内，并沸水浴内煮半小时，冷却后4℃冰箱冷藏。

    1.1.4 实验主要试剂 胎牛血清(FBS):Gibco 公司;RPMI Medium 1640:Gibco 公司;PBS:杭州科易生物技术有限公司;胰蛋白酶(0.25%胰酶+0.02%EDTA):杭州吉诺生物医药技术有限公司;二甲基亚砜(DMSO):Amersco 公司;小鼠CEA ELISA 试剂盒:杭州达文生物科技有限公司，R＆D 公司进口分装;小鼠sCD44 ELISA 试剂盒:杭州达文生物科技有限公司，R＆D 公司进口分装。

    1.1.5 实验仪器 自动平衡离心机LDZ5-2:北京医用离心机厂;5%CO2培养箱HEPA class100:Thermo 公司;倒置显微镜:Olympus 公司;生物安全柜:Thermo 公司;电热恒温水浴器DK-S24型:上海森信公司;电子天平:浙江凯丰集团有限公司;液氮储存罐:Thermo 公司;超低温冰箱:日本SANYO 公司;移液器:Eppendrof公司 ......