田 晨 赵宗江 张新雪 张丰丰 程明秀 王颖超 赵 敬 吴志奎

    (1 北京中医药大学基础医学院细胞与生化实验室，北京，100029； 2 中国中医科学院广安门医院，北京，100053)

    补肾益髓生血法AA大鼠含药血清对大鼠造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响

    田 晨1赵宗江1张新雪1张丰丰1程明秀1王颖超1赵 敬1吴志奎2

    (1 北京中医药大学基础医学院细胞与生化实验室，北京，100029； 2 中国中医科学院广安门医院，北京，100053)

    目的：探讨补肾益髓生血法再生障碍性贫血(Aplastic Anemia，AA，简称再障)大鼠含药血清对大鼠骨髓造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响。方法：在前期整体动物实验的基础上，体外培养正常大鼠造血干细胞，诱导其定向红系分化，分为空白对照组、正常对照组、模型组、司坦唑醇组(康力龙组)、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组，在培养体系中加入含药血清干预4d后，提取红系细胞总RNA及蛋白，分别采用RT-PCR和Western blot检测细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达情况。结果：与正常对照组相比，模型组细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达均明显降低(P1 材料

    1.1 细胞 正常大鼠骨髓单个核细胞，SD大鼠，体重(200±20)g。

    1.2 主要试剂 IMDM(Gibco，批号：12200036)，大鼠外周血淋巴细胞分离液(天津灏洋，批号：LTS1083)，干细胞因子(SCF，PeproTech，批号：0110258)，重组大鼠白细胞介素3(IL-3，PROSPEC，批号：1108RIL301)，重组人促红细胞生成素(EPO，赛博尔，批号：201206042)，兔单克隆抗体JAK2(Cell Signaling Technology，批号：D2E12)，兔多克隆抗体STAT5(abcam，批号：ab68465)，β-acting单克隆抗体(Cell Signaling Technology，批号：4970)，山羊抗兔IgG HPR(康为世纪，批号：CW0103)，甲叉丙烯酰胺(Ameresco，批号：2967B040)，甲叉双丙烯酰胺(Ameresco，批号：1209B293)，cDNA第一链合成试剂盒(promega，A3500，批号：0000073779)，Go Taq○RGreen Mix(promega，批号：0000040423)，JAK2、STAT5、GAPDH、β-actin引物合成于生工生物有限公司 ......