吴 莹 陈向阳 玄子男 李宇航

    (北京中医药大学基础医学院，北京，100029)

    经方指《伤寒论》和《金匮要略》所记载之方剂。经方具有用药精当、剂量准确;组方严谨、配伍巧妙;剂型丰富、煎服有法;加减灵活、功效卓著等特点，为历代医家进行方剂研究的首选对象[1]。然而，经方的现代研究同样面临药理作用机制复杂、有效成分不明确等问题，从而制约了经方在现代医学领域的推广以及国际化的进程。因此，凭借现代药学、免疫学及分子生物学等技术手段，从经方主要活性成分的鉴定、药理作用的分子机制等方面揭示经方的作用机制，是经方现代研究的重要关节之一。基于此，我们在本文将介绍高效液相色谱(High-Performance Liquid Chromatography，HPLC)相关技术在经方成分鉴定，以及免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)、激光共聚焦技术在经方药理作用机制研究方面的应用及思路。

    1 HPLC及高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)技术在经方现代研究中的应用

    现代药理学研究需要明确药物成分、含量以及质控。HPLC及其相关技术是以液体作为流动相，采用高压泵、高效固定相、高灵敏度检测器发展而成的一种分离分析方法，由于具有准确快速等优势，常用于检测药物的主要成分及含量，是药物分析研究中关键的质控技术。HPLC凭借其高效、高速、可分离大多数液体样品等优势，已经广泛应用于药物的含量测定[2-3]、成分分析[4-5]、质量控制[6-7]等方面。同时，利用HPLC的高分离效能和质谱技术(MS)的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点，将HPLC与MS联合使用，更加有利于准确分析药物组分[8-9]。HPLC及HPLC-MS联用技术的优越性，使其广泛被应用到经方成分及含量的鉴定中。经方的HPLC、HPLC-MS分析涉及经方样品的前处理、经方成分的定量分析、定性分析以及经方的药物代谢研究等方面。

    1.1 经方样品的前处理 经方汤剂是我国应用最早、最广泛的一种剂型，是将加工炮制或未经炮制的药材纳入饮用水(或其他专用水)中浸泡，再经煎煮去渣取汁制成的液体制剂[10]。煎煮法是我国中药复方传统的提取方法，也是现代经方研究过程中最常采用的提取方法。煎煮方法直接影响到药物有效成分的溶出量，不同经方煎煮方式会有所不同，需高度重视。魏惠珍等[11]将大黄36 g，厚朴27 g，枳实27 g，芒硝13.5 g浸泡在8倍量水中30 min，加热煮沸后，文火慢煎40 min，放冷，纱布滤过得大承气汤 ......