哈 略 赵百孝

    (北京中医药大学针灸推拿学院，北京，100029)

    专题——艾灸疗法的作用机制及创新应用

    艾灸对动脉粥样硬化小鼠炎性反应因子及MMP-9的实验研究

    哈略赵百孝

    (北京中医药大学针灸推拿学院，北京，100029)

    目的：观察艾灸对ApoE-/-小鼠主动脉内肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响，并从抑制炎性反应，稳定动脉粥样硬化斑块等角度探讨艾灸在防治动脉粥样硬化中的机制。方法：将48只采用高脂饮食喂养的载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE-/-小鼠)作为动脉粥样硬化模型，并随机分为3组：艾灸组，模型组，药物对照组。并将16只同龄相同遗传背景的C57BL/6小鼠作为空白对照组。空白组、模型组小鼠每天常规抓取、固定，并放置假艾灸装置。艾灸组小鼠每天抓取固定，并艾灸膻中穴。药物组小鼠每天采用辛伐他汀0.28 mg/100 g灌胃，所有干预20 min/d，6 d/周，干预14周后牺牲，取材检测。Elisa法测定主动脉内TNF-α、IL-10、MMP-9的含量。油红“O”染色观察胸主动脉病理改变。结果：1)与模型组相比，艾灸组，药物组小鼠主动脉内TNF-α、MMP-9含量明显降低(P1 实验材料

    1.1实验动物本实验选用8周龄健康雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE-/-小鼠)作为AS模型，同龄相同遗传背景非转基因野生C57BL/6小鼠作为空白对照。小鼠均购于北京维通利华实验动物有限公司。ApoE-/-小鼠采用高脂饲料喂养，(饲料购自北京维通利华实验动物有限公司，含15%猪油、2%胆固醇、0.05%胆酸)，C57BL/6小鼠采用常规饲料喂养。所有小鼠均可自由进食饮水；饲养环境温度为(23±2)℃,湿度为50%～60%左右。采用人工控制室内照明,保持12 h光照(8：00—20：00)和黑暗(20:00—次日8:00)交替循环。

    1.2主要试剂和仪器1)特制细艾条：规格φ0.5 cm×20 cm,购自河南南阳汉医艾绒有限公司；2)辛伐他汀购自广东杭州默沙东制药有限公司;3)小鼠固定器：规格150 mm×65 mm×50 mm，可固定小鼠头、尾、四肢部位，底板处设有小孔，可暴露胸部，购自上海华岩仪器设备有限公司；4)小鼠灌胃针：规格：12号总长40 mm弯针，购自北京百诺威生物科技有限公司；5)低温离心机，德国ZK380型；6)超低温冰箱，日本三洋公司产；7)电子天平，河南爱博科技发展有限公司LEICA CM1850冰冻切片机；8)Leica RM2235石蜡切片机；9)Leica冰冻组织包埋剂；10)Leica HI1220烤片机；11)Leica ST5020全自动组织脱水机；12)显微镜：Nikon E200光学显微镜；13)拍照系统：佳能450D相机；14)Olympus bx51显微镜；15)肿瘤坏死因子(TNF-α)酶联免疫吸附测定(Elisa)试剂盒 ......