李木松 张贵贤 魏媛媛 刘震霞

    (保定市传染病医院肝五A科,保定,071000)

    茵陈蒿汤对肝纤维化大鼠肝组织内质网应激caspase-12通路的影响

    李木松张贵贤魏媛媛刘震霞

    (保定市传染病医院肝五A科,保定,071000)

    目的:观察茵陈蒿汤对胆汁瘀积性肝纤维化大鼠肝组织内质网应激caspase-12通路的影响,探讨茵陈蒿汤抗胆汁瘀积性肝纤维的作用机制。方法:将35只SD大鼠分为假手术组和造模组,采用胆总管结扎法复制胆汁瘀积性肝纤维化大鼠模型,1周后将造模组动物分为模型组和中药组,中药组予以3.5 g/kg茵陈蒿汤灌胃,4周后处死动物,HE、Masson染色观察肝脏组织病理学变化;Western blot法检测各组大鼠肝脏GRP78、eIF2α和Caspase-12蛋白表达变化。结果:肝脏组织病理学变化显示模型组大鼠肝纤维化程度较假手术组明显增加(P1 材料与方法

    1.1动物及试剂35只SPF级雄性SD大鼠,体质量(180±20) g,由河北医科大学实验动物中心提供。HE染液和Masson染液购自福州迈新生物技术公司;细胞组织裂解液RIPA和蛋白酶抑制剂PMSF购自上海碧云天公司;丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺购自美国Sigma公司;GRP78、eIF2α和Caspase-12和β-actin抗体购自美国Santa Cruz公司。

    1.2药品制备茵陈蒿汤《伤寒论》由茵陈18 g,栀子12 g,大黄(去皮)6 g,根据《中药药理研究方法学》大鼠剂量=人剂量×35(人转换因子)/6(大鼠转换因子)计算出人鼠等效剂量为3.5 g/kg。按传统工艺制备成水煎剂,减压浓缩至0.35 g/mL备用。

    1.3实验方法将实验动物随机分为造模组(25只)和假手术组(10只),采用胆管结扎法复制胆汁瘀积性肝纤维化模型。术前禁食不禁水12 h,用盐酸氯胺酮肌肉注射进行麻醉(100 mg/kg),常规皮肤消毒后,沿腹部正中线切开皮肤以充分暴露胆总管,于胆总管远近端分别结扎后从中间离断,关腹;假手术组仅开腹暴露并游离胆总管但不结扎,关腹。于造模1周后,造模组随机分为模型组(11只),中药组(各12只)。于4周末处死动物。按造模时方法盐酸氯胺酮麻醉,腹主动脉采血,分离血清,-80 ℃冰箱保存。取全肝脏称重后,于肝右叶固定位置切取1.0 cm×1.0 cm大小2块肝组织,中性甲醛溶液固定,石蜡包埋后行HE、Masson染色;其余肝组织于液氮中速冻后转移至-80 ℃冰箱保存备用。

    1.4病理学检查将甲醛固定后的肝组织行石蜡包埋,苏木精-伊红(HE)染色和Masson三色胶原纤维染色,400倍光镜下观察肝组织病理变化 ......