吴淑馨 孙宏峰 龙泓竹 张 力 田文杨 白 颖 丛佳林 杨晓晖

    (北京中医药大学东方医院内分泌科，北京，100078)

    益消方对自发糖尿病小鼠血清和心肌组织IGF-1表达的影响

    吴淑馨孙宏峰龙泓竹张力田文杨白颖丛佳林杨晓晖

    (北京中医药大学东方医院内分泌科，北京，100078)

    目的：观察益消方对KKAy糖尿病小鼠血清和心肌组织IGF-1表达的影响，探讨其对糖尿病心肌保护的可能机制。方法：选用KKAy小鼠及C57BL/6J小鼠，随机分为正常组、模型组和中药组，分别灌服蒸馏水及益消方中药，在实验的4、8、12周取材后，运用ELISA的方法检测血清中IGF-1的表达，运用实时定量PCR的方法检测心肌组织IGF-1 mRNA的表达。结果：在实验的不同阶段，与正常组相比，KKAy糖尿病小鼠模型组的血清及心肌组织中IGF-1的表达明显降低(P1 材料与方法

    1.1动物及分组健康雄性C57BL/6J小鼠40只及KKAy小鼠80只，均为10～12周龄(许可证号：SCXK京2009-0007及SCXK京2009-0004)，购自中国医学科学院实验动物研究所。饲养环境为室温(21±1)℃、相对湿度30%～40%，通风自然，自由饮水，适应性饲养1周后，测血糖，80只KKAy小鼠测随机血糖均≥13.9 mmol/L，符合糖尿病的诊断标准。

    将80只KKay小鼠随机分为模型组和中药组，C57BL/6J小鼠为正常对照组，各组小鼠均为40只。

    1.2给药方法分组后给药，灌胃量根据人与小鼠间的体表面积折算系数计算，经计算，小鼠给药剂量为20.2 g/kg体重，即中药组予20.2 g/kg体重灌服“益消方”中药，模型组及正常组予20.2 g/kg体重的剂量灌服蒸馏水，每组分别在4、8、12周末取材10只小鼠。留取血清做ELISA，留取心肌组织做RT-PCR。

    1.3药物及试剂益消方处方由黄芪等中药组成，方中药材购自东方医院中药房。IGF-1 ELISA检测试剂盒(美国abcam公司，批号ab100695)；RT-PCR试剂盒(Promega公司,批号M6101)

    1.4血清中IGF-1的测定采用酶联免疫吸附法(ELISA法)，分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μL，然后再加待测样品10 μL，经过温育、洗涤、加酶、再次温育、洗涤、显色，450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

    1.5心肌组织IGF-1的测定采用实时定量PCR方法检测心肌组织IGF-1 mRNA的表达 ......