党晓洁

    (西安市第四医院眼科,西安,710004)

    藏红花对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡过程中线粒体途径的影响

    党晓洁

    (西安市第四医院眼科,西安,710004)

    目的:观察藏红花对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡过程中线粒体功能的影响。方法:采用随机数字表法将72只8～10周龄健康无眼疾SD雄性大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、藏红花治疗组,每组24只。正常对照组大鼠不作任何处理。其余组采用链脲佐菌素(SYZ)25 mg/(kg·d)连续腹腔注射3 d,1次/d,建立2型糖尿病模型,以血糖≥16.7 mmol/L为造模成功。模型成功建立后,藏红花治疗组50 mg/kg的剂量腹腔注射藏红花素溶液,1次/d,连续3个月。并检测3组大鼠视网膜醛糖还原酶(AR)、神经细胞凋亡及视网膜中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bcx)、细胞色素C(cyt-c)、半胱天冬酶-3(cespase-3)蛋白的表达。结果:糖尿病模型组大鼠视网膜中的AR活性明显高于正常对照组和藏红花治疗组,且差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 建立糖尿病大鼠模型、分组及视网膜取材 雄性SD大鼠72只,体重200～250 g,无特定病原体级,医药大学实验动物中心提供。采用随机数字表法将72只8～10周龄健康无眼疾SD雄性大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、藏红花治疗组,每组24只。正常对照组大鼠不作任何处理。其余组采用链脲佐菌素(SYZ)25 mg/(kg·d)连续腹腔注射3 d,1次/d,建立2型糖尿病模型,以血糖≥16.7 mmol/L为造模成功。模型成功建立后,藏红花治疗组50 mg/kg的剂量腹腔注射藏红花素溶液,1次/d,连续3个月。大鼠水合氯醛麻醉后,取得视网膜血管组织。

    1.2 紫外分光光度测定视网膜AR活性 取液氮中保存的视网膜,按体积比1∶4加入预冷的(0.01 mmol/L PBS,pH 7.2～7.4)制成组织匀浆,4 ℃、3 000 r/min离心15 min,离心半径13.5 cm,上清即为酶粗提取液,用BCA蛋白定量试剂盒对蛋白的表达进行定量分析。AR活性测定反应体系的组分(最终浓度)为:0.1 mol/L PBS[内含0.4 mol/L(NH4)2SO4,pH 6.2],0.08 mmol/L NADPH,5 mmol/L DL-甘油醛,5 L酶粗提取液,反应体积100 L。其中DL-甘油醛为反应底物。反应自加入底物开始,37 ℃水浴反应5 min,加入预冷的PBS终止反应,采用DU800型紫外分光光度计(美国Beckman Coulter公司)测定NADPH在340 nm处的吸光度(A340)值 ......