取小鼠脑与脊髓组织，按1∶7的比例加入蛋白裂解液，匀浆后，置于冰上30 min，4 ℃离心20 min后，取上清液。建立标准曲线，每孔加上清液100 μL，将96孔板置于37 ℃，反应120 min后，严格按照试剂盒说明书步骤进行检测。用酶标仪测定450 nm处吸光值，制作标准曲线，计算样本浓度，根据样本蛋白浓度，稀释使其终浓度为3 μg/μL。取样本7 μL(含21 μg蛋白)蛋白样品进行10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶(SDSPAGE)电泳，电转50 min，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，分别加入BDNF(1∶10 000)/TrkB(1∶20 000)/βtubulin(1∶100 000)的单克隆抗体，4 ℃过夜后，TBST洗膜4次，每次10 min，加入辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶20 000，抗兔/小鼠)，室温孵育1 h，洗膜4次，每次5 min后，于暗室进行胶片曝光、显影和定影。通过Image J图像分析系统测定各蛋白条带的灰度值，以目的蛋白条带的灰度值与内参βtubulin条带灰度值的比值表示各蛋白的相对表达水平 ......