蜂毒素抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的机制研究(3)
1.2.3 检测指标与方法1.2.3.1 在第14天,收集所有小鼠的肺组织4%多聚甲醛内固定12 h,梯度乙醇脱水,包埋切片,采用苏木精伊红染色法(HE)光镜下观察肺组织病理形态改变。此外,进行Masson三色染色以测量胶原纤维的密度。通过炎性细胞的浸润,肺泡壁的厚度以及胶原沉积的严重程度来评估PF的程度。
1.2.3.2 羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)含量测定 右肺组织液氮保存,取肺组织匀浆进行羟脯氨酸含量测定,以检测肺组织胶原沉积情况,操作严格按照说明书进行。
1.2.3.3 ELISA检测TGF-β1、CollagenⅠ/Ⅲ、MMP2/9含量 留取小鼠血清,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定TGF-β1、CollagenⅠ/Ⅲ、MMP2/9,抗小鼠TGF-β1、CollagenⅠ/Ⅲ、MMP2/9单克隆抗体(单抗)包被于酶标板上,标准品及肺组织中的TGF-β1、CollagenⅠ/Ⅲ、MMP2/9与其单抗结合,室温孵育2 h后洗涤5次 ......
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