药用植物珊瑚菜GlAT基因的克隆和生物信息学分析(3)
2.2 珊瑚菜真叶总RNA提取将实验组与空白组的珊瑚菜材料每株选取1～2片真叶，置于液氮速冻，采用天根生化科技(北京)有限公司的植物多糖多酚植物总RNA提取试剂盒提取珊瑚菜真叶中的总RNA，采用宝日医生物技术(北京)有限公司的PrimeScriptTMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit cDNA反转录试剂盒，对总RNA进行反转录，最终获得实验材料的cDNA。
2.3 荧光定量PCR
使用Primer-BLAST对GlAT的阅读框全长序列进行荧光定量PCR引物设计，引物序列为F：GAAGGGAAGGGGATGGAAGTG，R：GACTTGTCTTCGTACACTGGATTT。引物合成在生工生物工程(上海)股份有限公司完成。以珊瑚菜内源Actin为内参基因，以2.2合成的cDNA为模板，构建体系后置于荧光定量PCR仪中反应。定量程序第1步：95 ℃，30 s。第2步：95 ℃，5 s、54 ℃，30 s、72 ℃ ......
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