1.2.3.4 Western blot法检测Sp1、Gata4、TGF-β1、ColⅠ及Tsp1蛋白表达 按照Protein Extraction Kit试剂盒提取组织总蛋白。取60 μg蛋白样品100 ℃煮沸变性10 min后，经SDS-PAGE凝胶电泳，按照电流300 mA恒流转膜2 h至PVDF膜上。随后将PVDF膜浸泡于Milk Blocking Buffer中，摇床中轻摇1 h，加入抗体Sp1(1∶500)、Gata4(1∶500)、TGF-β1(1∶500)、ColⅠ(1∶500)、Tsp1(1∶500)4 ℃孵育过夜。洗膜后，孵育二抗(1∶5 000)。TBST冲洗，在ECL显色液中浸泡PVDF膜1 min，于暗室中进行曝光、显影并定影。以β-actin(1∶3 000)為内参，利用Quantity One v.4.6.2软件读取数据。

    1.3 统计学方法 采用SPSS 20统计软件对所得实验数据进行分析，结果以均数±标准差(±s)表示 ......