魏华民 俞静 郭秋均 刘瑞 花宝金

    摘要 目的：構建肺转移前微环境体外模型，观察S1pr1-stat3信号通路在模型成熟过程中的作用，同时验证双参颗粒对该模型的干预作用，探讨其可能的机制。方法：体外构建小鼠Lewis肺癌细胞和原代骨髓细胞共培养模型，并用S1pr1激活剂SEW2871干预髓系细胞分化的过程，观察相关蛋白MMP9、Lox、Version及Fibronectin的表达情况，并检测模型中骨髓来源的抑制性细胞(MDSCs)细胞的分化情况及双参颗粒对模型的干预效果。结果：S1pr1可以明显促进肺转移前微环境体外模型的成熟构建，S1pr1-stat3是该模型成熟的关键信号通路，双参颗粒不仅显著降低模型中该信号通路相关蛋白的表达，同时对微环境成熟的关键蛋白的表达也具有抑制作用，还可显著降低该信号通路相关的骨髓细胞向MDSCs细胞的分化(P90%。

    共培养技术构建转移前微环境体外模型构建：在transwell小室中上室加入Lewis细胞3×105个(加入sew2871激活s1pr1受体1 μg/mL)，下室加入按比例混匀的肺单细胞悬液和MDSCs的混合物(1∶0、1∶0.3、1∶0.6、1∶1、0∶1)使下室细胞总数为3×105个。培养24 h后，对下室内容物进行转移前微环境标志物检测。

    1.2.2 给药方法 药物干预体外模型分为3组即正常组，Sew2871组(给予Sew2871，1 μg/mL)，双参颗粒组(给予双参颗粒5 mg/mL)。MDSCs分化试验分为6组即正常组、正常组培养24 h、正常组培养96 h、阳性对照组培养96 h(给予sew2871，1 μg/mL)、双参颗粒(shuangshen)加SEW2871共培养96 h组、5-Fu加SEW2871共培养96 h组(给予5-氟尿嘧啶0.6 μg/mL) ......