周亚兵 蒋思韵 王利维 华丽

    摘要 目的：基于气道IL-17/IL-23炎症介质轴，探讨人参皂苷Rg1对PM2.5哮喘大鼠肺损伤保护机制。方法：采集并分离交通相关大气细颗粒物PM2.5，利用卵白蛋白致敏和激发建立幼龄哮喘大鼠模型，再给予PM2.5气管滴注建立PM2.5哮喘肺损伤模型，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1含量，RT-PCR检测RORγt mRNA表达，并行肺组织病理和电镜分析。结果：成功建立PM2.5气管滴注哮喘大鼠模型;哮喘大鼠模型血清和肺泡灌洗液IL-17a、IL-6、IL-23、TGF-β1表达量增大(P85%，得到支气管肺泡灌洗液。用双抗体夹心ELISA法测定，按照连续倍比稀释标准品，然后将样本与检测抗体混匀，室温避光孵育1 h，洗涤后全自动酶标仪450 nm波长处，测定吸光度值(A450)并绘制标准曲线。

    1.2.3.4 RT-PCR检测肺组织RORγt mRNA表达

    右下肺组织置于冻存管中，液氮中速冻后转入-80 ℃冰箱保存，采用TRIZOL法提取肺组织总RNA，取5 μL逆转录合成cDNA，以2.5 μL cDNA为模板，分别应用各组上下游引物行PCR扩增，引物序列：RORγt上游5′-AGTGTAATGTGGCC-3′，下游5′-GCTGCTGTTGCAGTTGTTTCT-3′，以相对表达量2-△△Ct法计算目的基因相对表达量，采用Roche软件分析RT-PCR条带平均灰度值。

    1.3 统计学方法

    采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量资料使用均数±标准差(±s)，多组间比较采用方差分析(方差齐性)，多组间两两比较采用LSD检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 一般情况 ......