李柯帆 王 枫 丁 雯 李晓兰 杜晨晖 闫 艳 裴香萍

    (1 山西中医药大学中药与食品工程学院，太原，030619； 2 山西大学中医药现代研究中心，太原，030006)

    化学定量分析方法由重量分析、容量分析与仪器分析3部分组成。其中仪器分析方法已广泛应用于中药化学成分分离与鉴别、药代动力学研究中的活性成分检测、中药材与中成药质量控制等。核酸作为生命的最基本物质之一，对于药用植物的生长以及活性成分的合成过程至关重要，关于中药化学成分的分析方法已建立较为成熟的体系，而目前常用分子定量技术对核酸进行定性定量的研究。

    分子定量技术包括实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)和数字PCR(Digital PCR，dPCR)。其中qRT-PCR技术为实现核酸定性定量研究奠定基础，qRT-PCR技术是通过在PCR体系中加入荧光结合集团或荧光探针，利用荧光信号的累积对整个PCR进程进行实时监测的技术。通过实时监测荧光量的变化，获得待测物质达到荧光检测阈值的循环数(Cycle Threshold，Ct值)[1]。PCR过程中，可以通过荧光信号的强度变化实时监测扩增产物量的变化[2]。实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性好、定量准确、快速简便及高通量等特点，因此在微生物分析、食品科学研究、临床诊断、肿瘤早期研究等领域的应用十分广泛。qRT-PCR在微生物生态学领域中常用于对微生物群落的生理代谢、空间分布及动态变化等过程的监测[3]。在医学领域常用于染色体病、基因病的诊断，对肿瘤早期诊断、分型与分期的判断，以及对病原体DNA的定性及定量检测方面的研究[4]。在食品科学领域常用于对食品中可能含有的有害细菌进行定量检测分析，针对转基因食品安全问题建立转基因食品检测方法[5-6]。近年来，随着分子生物学技术以及合成生物学领域的相关发展，其在药用植物基因表达与药用植物品种鉴别中的应用也越来越广泛。

    1 药用植物基因表达分析

    实时荧光定量PCR是基因分析表达的一种有效方法，能够检测目标基因在mRNA水平上的表达差异，以内参基因作为标准的相对定量是目前最常用的DNA定量方法，内参基因能够校正目的基因的相对表达量，确保PCR定量结果的准确性，对于目的基因表达的差异分析是理清药用植物中活性物质合成途径的先决条件，因此筛选出稳定的内参基因能够为目的基因表达差异的进一步分析奠定基础。近几年在中药领域，qRT-PCR技术在药用植物基因表达分析中得到广泛应用，目前在何首乌、北柴胡、连翘、茅苍术、沙氏鹿茸草、远志和越南参变种(野三七)等药用植物中研究报道较多[7-19] ......