王 敏 韩 婷 李春帅 徐文娟 杨琳琳 张姝妍 程水清 王 璇 文 佳 李向日

    (北京中医药大学中药炮制研究中心/北京市中药品质评价重点实验室，北京，102488)

    大黄是蓼科植物掌叶大黄(PalmatumL.)、唐古特大黄[RheumtanguticumMaxim,ex Bal(F)]或药用大黄(RheumofficinaleBaill.)的干燥根和根茎[1]。其药用历史悠久，最早见于《神农本草经》。“主下瘀血，血闭，寒热，破癥瘕积聚，留饮，宿食，荡涤肠胃，推陈致新，通利水谷，调中化食，安和五脏”，列为下品。大黄临床应用极其广泛，有“将军”之称，目前在临床上多用于胃肠道疾病和慢性肝病等的长期治疗。研究发现，大黄具有良好的保肝作用，可使肝脏免受纤维化、肝硬化、肝癌以及各种类型的肝炎等的发病[2-7]。统计《中华人民共和国药典》(2020年版)、中医方剂数据库、药智网，得到以大黄入药的古方7 000多首和现代中成药处方700多条[8]。目前，大黄被欧洲各国、美国等许多国家所认可，它已作为一种世界性药物被列入19个国家的药典[9]。

    然而，有报道称，长期服用大黄制剂可能存在肝损伤的风险[10-11]。尽管大黄安全性引起了公众的质疑，但其仍是临床肝病治疗的常用药物，因此，对大黄的肝毒性评估是必不可少的。同时，大黄生品苦寒，药性峻烈，易损伤脾胃功能，耗损元气，对于久病体弱、年老患者可选用药性缓和的炮制品，以降低不良反应[12]。关于大黄的炮制最早见于汉代张机的《金匮玉函经》，“皆去黑皮、或炮或生，清酒洗，酒浸”[13]。传统用药常根据辨证选择不同炮制品施治，目前大黄有多种炮制规格，其中临床以熟大黄较为常用。

    斑马鱼与人类的基因具有87%的同源性，其基因的传导通路和代谢通路与哺乳动物也有高度的相似性[14-15]。作为一种新兴模式生物，斑马鱼兼具体外细胞模型的高通量性和啮齿类动物模型的生物复杂性等优势，同时基于其发育迅速、繁殖快、操作简单等特点[16-18]，近些年，作为一种替代模型被广泛应用于药物诱导肝毒性的评价。为了更深入地探讨大黄肝毒性，本研究以不同批次的生大黄、熟大黄为研究对象，利用斑马鱼幼鱼肝毒性评价方法和现代化学技术分析大黄及其炮制品的化学成分差异和毒性大小，探讨大黄炮制减毒的物质基础和科学内涵，为临床合理用药和早期监测、诊断病情提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 野生型斑马鱼(品系：AB品系)、转基因型斑马鱼[品系：CZ16(gz15Tg,Tg(fabp10a：dsRed;ela3l：EGFP)]均购置于中国科学院水生生物研究所 ......