贾亚泉 宋军营 曾华辉 谢治深 张紫娟 袁 永 原 野 张振强 狄 波

    (1 河南中医药大学中医药科学院,郑州,450046; 2 中国中医科学院,北京,100700)

    痴呆主要以认知和自理能力下降为主要表现,其发病与肾、心、脾、肝等脏腑功能失调密切相关。因肾精生髓通于脑,若肾精亏耗,髓海不足,脑元失养而“肾精不足”致呆;因忧愁思虑,痰蒙心窍,致七情不遂使脏腑功能失调,气滞血瘀而“毒损脑络”致呆。本文在此中医病机理论指导下,以补肾填精,解郁散结治法,采用SAMP8小鼠建立“肾精不足”证痴呆动物模型和SAMR1小鼠双侧海马区注射Aβ1-40建立“毒损脑络”证痴呆动物模型,比较2种痴呆模型的差异,通过六味地黄丸和通络救脑滴丸分别对此2种痴呆症进行治疗,采用免疫印迹法(Western Blotting法)检测调节脑内Aβ代谢的关键蛋白胰岛素降解酶(Insulin-degrading Enzyme,IDE)、低密度脂蛋白相关蛋白1(Low-density Lipoprotein Receptor-related Protein 1,LRP1)和晚期糖基化终末产物受体(Receptor for Advanced Glycation end Products,RAGE)的表达,探讨六味地黄丸和通络救脑滴丸对不同拟老年痴呆症模型小鼠脑组织中Aβ降解的作用特点。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级SAMP8小鼠,雄性,32周龄,48只;SPF级SAMR1小鼠,雄性,32周龄,68只,购自北京华阜康实验动物有限公司,生产许可证号:SCXK(京)2020-0004。动物购回后饲养于河南中医药大学动物实验中心,使用许可证号:SYXK(豫)2021-0015,期间自由饮食,饲养温度控制在(22±1)℃,相对湿度(45±5)%,照明每12 h明暗交替1次。本实验通过河南中医药大学实验动物福利伦理委员会审查批准(伦理审查号:DWLL201911028)。

    1.1.2 药物 六味地黄丸(河南宛西制药股份有限公司,批号:18110401)、通络救脑滴丸(由栀子、三七组成,具有解营卫之毒、活血通络之功效,天津红日药业股份有限公司,批号:090603);盐酸多奈哌齐片(卫材药业有限公司,批号:1701069)。

    1.1.3 试剂与仪器 Aβ1-40(Sigma,德国,货号:A1075),Aβ抗体(Abcam,英国,货号:Ab11132),IDE抗体(Abcam,英国,货号:Ab25970),RAGE抗体(Abcam,英国,货号,Ab37647),LRP1抗体(Epitomics,美国,货号:2703-1),抗β-Actin鼠单克隆抗体(北京康为世纪生物科技有限公司,货号:CW1313),DAB试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司,货号:CW0211),UltraSensitive S-P(Goat)(福州迈新生物技术开发有限公司,货号:KIT-9709),放射免疫沉淀测定(Radio Immunoprecipitation Assay,RIPA)裂解液(上海碧云天生物科技有限公司,货号:P0013B),二辛可宁酸(Bicinchoninic Acid,BCA)蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物科技有限公司,货号:P0012) ......