张伊冰 亓焕伟 李家峰 亓焕明 李瀛伟 包永睿,3,4 孟宪生,3,4

    (1 辽宁中医药大学药学院,大连,116600; 2 沈阳百草济世肿瘤医药研究中心,沈阳,110041; 3 辽宁省现代中药研究工程实验室,大连,116600; 4 辽宁省中药多维分析专业技术创新中心,大连,116600)

    世界卫生组织最新公布的《世界癌症报告》显示:2018年,肝癌成为全球第6大常见癌症和全球第4大常见癌症致死因素,在亚洲和非洲的年龄标准化发病率高于美国、欧洲和大洋洲[1]。在中国癌症流行病学的最新报告中,肝癌在全国恶性肿瘤发病率排名第4位,约为26.92/10万,年发病患者约37万[2]。

    古草生机汤为沈阳百草济世肿瘤医药研究中心研制,由白花蛇舌草、黄药子、莪术等8味中药组成,有散结化痞、清瘀消滞、通利排毒等功效,在临床上用于恶性肿瘤的治疗和其他治疗方式的联合用药,经过多年数百病例观察均有很好的治疗效果。近年来该方剂治疗消化系统恶性肿瘤获得较好疗效,在治疗肝癌的同时,能够对肝脏功能、免疫功能起到一定的保护和调节作用,且具有不良反应小等特点,但其药效评价及具体抗肿瘤机制尚未有详细报道。本研究为2016、2017年度辽宁省创新团队研究项目——中药药效物质组学及作用机制整合研究中的一部分,旨在通过动物体内模型初步探究临床有效抗肝癌方剂——古草生机汤的抗癌作用机制。研究基于古草生机汤在临床应用所取得一定成果的基础上,探究该方剂对肝癌的抑制作用及分子机制,采用H22肝癌荷瘤小鼠模型,通过免疫器官、瘤体组织显微结构、血清指标、基因表达等不同层面,应用苏木精-伊红(Hematoxylin Eosin,HE)染色、酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR等方法对古草生机汤体内抑瘤和免疫调节作用进行药效学评价,为将来此药的临床应用及抗消化系统恶性肿瘤的进一步研究提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物与细胞 实验动物:无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级昆明种小鼠,8周龄,雄性,体质量为18～22 g(购于辽宁长生生物技术股份有限公司,许可证号SCXK(辽)2015-0001,辽宁中医药大学动物实验伦理号/动物使用许可证号SYXK(辽)2019-0004)。在室温(23±1)℃、相对湿度55%±5%、12 h/12 h昼夜交替日光灯照射动物房内饲养,摄食、饮水自由的环境中适应1周后,用于实验。细胞株:H22小鼠肝癌瘤株,购于江苏齐氏生物科技有限公司。

    1.1.2 药物 古草生机汤(由沈阳百草济世肿瘤医药研究中心提供),环磷酰胺(扬子江药业集团公司,批号:19032821) ......