王蔚陆 陈建新 朱 姜 梁丁龙 马彦旭

    (1 北京中医药大学中医学院,北京,100029; 2 北京中医药大学厦门医院,厦门,361009; 3 首都医科大学附属北京中医学院,北京,100010)

    骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种不由衰老引起,多受关节软骨生化改变与生物力学应力影响的退行性关节疾病。中医有“骨痹、膝痹、膝眼风”的相关记载。“骨痹”最早源于《黄帝内经·素问·长刺节论篇》[1],现代中医对其病因病机有了更全面的认识,认为素体年迈、骨节亏虚、筋骨失养,外加风寒湿邪侵袭,终致气血不通,脉络痹阻[2]。补骨脂又名破故纸、胡韭子[3]。蔷薇目,豆科植物成熟果实,出自《雷公炮炙论》。补骨脂素是补骨脂的主要成分,属于香豆素类化合物,能有效调控细胞因子,尤其是白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)通路所介导的滑膜-软骨交互作用。由于PSO在紫外线灯的照射下可产生光毒反应,有光致敏史的患者、儿童及孕妇应慎用。本文结合李梢教授提出的药理学的研究方法和评价标准[4-5],以受体或靶点为药物活性的治疗关键,探讨化合物作用受体机制及特性表达。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 人原代OA滑膜成纤维细胞(货号:JY-J884,培养体系:1×原代细胞基础培养基500 mL,4 ℃避光保存;100×原代细胞培养添加剂5 mL,-20 ℃避光保存;终浓度10%胎牛血清50 mL,-20 ℃避光保存;100×青霉素-链霉素双抗混合液(Penicillin-streptomycin Solution,P/S)5 mL,-20 ℃避光保存),人原代OA软骨细胞(货号:JY-J905,培养体系:1×原代细胞基础培养基500 mL,4 ℃避光保存;100×原代细胞培养添加剂5 mL,-20 ℃避光保存;终浓度10%胎牛血清50 mL,-20 ℃避光保存;100×P/S 5 mL,-20 ℃避光保存),以上细胞购自上海瑾原生物科技有限公司,25 mL培养瓶放置在孵育箱中,细胞培养基于碳酸氢盐的缓冲体系,设置5% CO2气体环境,维持pH=7.2,温度37 ℃。

    1.1.2 药物 药物:补骨脂素(成都瑞芬思德丹生物科技有限公司,批号:RFS-B06502005013)。

    1.1.3 试剂与仪器 TransZol Up Plus RNA Kit(TRANS,批号:ER501-01-V2);TransScript? Uni All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(TRANS,批号:AU341-02-V2);实时荧光定量PCR试剂盒(康为世纪,批号:CW0659) ......