宋爱珍 周 杨 尚春光 吴智春,2 于华芸,2

    (1 山东中医药大学中医学院,济南,250355; 2 山东省中医经典名方协同创新中心,济南,250355)

    痴呆是一种以认知损害为特征的临床综合征,其损害程度足以影响患者的日常生活和社会交往,我国痴呆患病率为7.2%,高于6.2%的全球平均水平[1],且随着我国人口老龄化的不断加深,其患病率逐年增高,给家庭和社会带来沉重负担。

    中医药在痴呆的预防和治疗中具有明显优势[2-3]。肾虚髓亏、痰瘀阻窍是痴呆常见的病因病机,临证治疗从益精填髓、化痰祛瘀着手,多有佳效[4-6]。加味孔圣枕中丹(Modified KongSheng Zhenzhong Pill,JWKSP)是《备急千金要方》孔圣枕中丹加减化裁的方剂,临证治疗肾虚痰瘀阻窍型痴呆具有一定疗效[7]。实验研究亦发现本方能够改善多种痴呆动物模型的学习记忆力[8-9],但其具体分子机制有待进一步明确。网络药理学基于“中药-成分-靶点-通路-疾病”互作网络,能系统、整体地分析中药以及有效成分与疾病、靶点、通路之间的关系,与中药复方多成分、多靶点、多通路协同作用特点相符合,可为中药复方药效物质基础和分子作用机制研究提供一定参考[10-11]。本研究基于网络药理学策略,结合分子对接技术,从多成分、多靶点、多通路角度分析JWKSP治疗痴呆的可能药效物质基础和潜在作用靶点,探讨其作用机制,为本方临床与实验研究提供思路和依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 取无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级雄性SD大鼠24只,6周龄,体质量240～260 g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供[动物许可证号:SCXY(京)2016-0011]。大鼠饲养于IVC独立送回风净化笼,恒温24 ℃,恒湿42%,光照明暗交替12 h/12 h,实验前适应性饲养7 d,自由摄食、摄水。实验动物及操作均符合山东中医药大学医学实验动物中心伦理委员会原则(伦理审批号:2019-0034)。

    1.1.2 药物 JWKSP由山东中医药大学附属医院药剂科煎制,每毫升含龟甲0.33 g、生龙骨0.33 g、山茱萸0.28 g、肉苁蓉0.22 g、石菖蒲0.17 g、远志0.17 g、丹参0.28 g、川芎0.22 g。

    1.1.3 试剂与仪器 脑源性神经营养因子(Brain-derived Neurotrophic Factor,BDNF)小鼠单克隆抗体(Abcam公司,美国,货号:ab205067),浓缩型DAB试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司,货号:ZLI-9017),超薄切片机(徕卡微系统有限公司,德国,型号:UC-7),石蜡切片机(徕卡微系统有限公司,德国,型号:MDF-382E),光学显微镜(Olympus公司,日本,型号:CX41) ......