张敬美 薛思明 李伟利 陈 欢 卢令慧 王其艳

    (1 北京中医药大学生命科学学院,北京,100029; 2 北京中医药大学证候与方剂基础研究教育部重点实验室,北京,100029; 3 北京中医药大学证候与方剂基础研究北京市重点实验室,北京,100029; 4 北京中医药大学中医学院,北京,100029)

    阿霉素(Doxorubicin,DXR)是一种高效的化疗药物,在临床上广泛用于癌症治疗[1-2]。然而其在长期使用过程中会对人体产生严重的不良反应,尤其是心肌损伤[3-6],可导致左心功能不全,甚至心力衰竭。目前右丙亚胺是美国食品药品监督管理局唯一推荐用于减轻阿霉素心肌损伤的药物,虽然被证明有一定的心脏保护作用,但其会加重骨髓抑制,并出现神经毒性、食欲下降、恶心呕吐、静脉炎、腹泻等不良反应[7]。因此,还需要更多的基础和临床研究积极寻找安全且有效的防治阿霉素心肌损伤的药物。

    芪参颗粒(Qishen Granules,QSG)是由黄芪、丹参、金银花、玄参、附子、甘草6味药材组成,临床研究表明其可显著提高心力衰竭患者的射血分数和中医证候积分[8],降低患者的N末端B型利钠肽原(N-terminal Pro-B-type Natriuretic Peptide,NT-proBNP)水平[9]。此外,前期本课题组研究表明QSG可显著改善心力衰竭大鼠和小型猪的心功能并减少心肌纤维化[10-11]。但是关于QSG治疗阿霉素心脏毒性的报道尚不多,其机制亦不明确,因此本研究将结合网络药理学和体内体外实验探索并验证QSG减轻阿霉素心脏毒性的机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级雄性C57BL/6J小鼠,6～8周龄,体质量(20±2)g,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,动物许可证号为SCXK-(京)-2019-0010,饲养于北京中医药大学SPF级动物房内。按照随机数字法分组,动物自由进食饮水,并按照自然昼夜节律光照。本实验获得了北京中医药大学伦理委员会批准(伦理审批号:BUCM-4-2018001201-1014)。

    1.1.2 药物 芪参颗粒(由北京中医药大学自主制备加工处理),普伐他汀(上海第一三共制药有限公司,货号:H20060271),阿霉素(GLPbio公司,美国,货号:GC17576)。

    1.1.3 试剂与仪器 BCA定量试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司,货号:P1511-1),Cell Counting Kit-8(江苏凯基生物技术股份有限公司,货号:KGA317),CBA Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit(BD公司,美国,货号:560485),磷酸化蛋白激酶B(Phospho-protein Kinase B,p-AKT)抗体(CST,美国,货号:#13038),磷酸化促分裂原活化的蛋白激酶(Phosphorylated Mitogen Activated-protein Kinase,p-MAPK)抗体(CST,美国,货号:#9211),促分裂原活化的蛋白激酶P38(Mitogen-activated Protein Kinase P38,MAPKP38)抗体(CST,美国,货号:#9212),磷酸化核因子κB P65(Phospho-Nuclear Factor kappa-B P65,p-NF-κB P65)抗体(Abcam,美国,货号:ab28856),甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase,GAPDH)抗体(Abcam,美国,货号:ab181602),Goat anti Rb二抗(Abcam公司,英国,货号:ab6721),PBS缓冲液(Servicebio公司,货号:G4202),多聚甲醛固定液(Servicebio公司,货号:G1101),DMEM培养基(Gibco,美国,货号:C11995500BT),Trypsin-EDTA(Gibco公司,美国,货号:25300-054),双抗-青链霉素混合液(AQ公司,货号:AQ512),RIPA组织细胞裂解液(Biorigin公司,货号:BN25012-A),蛋白酶抑制剂(普利莱,货号:P1265),蛋白磷酸酶酶抑制剂(普利莱,货号:P1260),ECL Plus超敏发光液(Solarbio,货号:PE0010),无蛋白快速封闭液(雅酶,货号:PS105),一抗稀释液(Biorigin,货号:BN21010),大小鼠尾静脉显像仪(南京卡尔文生物科技有限技术公司,型号:KW-XXY),小动物超声影像系统(加拿大VisualSonics公司,美国,型号:Vevo TM2100),离心机(Eppendorf公司,德国,型号:5424R),组织超声破碎仪(Qiagen公司,德国,型号:HildenTissueLyser II),Multiskan全自动酶标仪(Thermo公司,美国,型号:MK3),低温离心机(Eppendorf公司,德国,型号:5424R),凝胶成像仪及图像分析系统(Bio-rad公司,美国,型号:Molecular lmagery ChemiDocTM XRST),流式细胞仪(BD公司,美国,型号:LSRFortessa) ......