潘小娟 史晓光 汪唐顺 陈振宙 左禧萌

    (1 北京中医药大学,北京,100029; 2 北京中医药大学东直门医院,北京,100700)

    乳腺癌已经成为全球女性新发癌症中发生率最高的癌症[1-2]。目前乳腺癌的治疗方法主要为手术、放化疗及靶向治疗等。化疗作为乳腺癌的主要治疗手段之一,不良反应主要为恶心呕吐、骨髓抑制及心脏毒性等[3],这些不良反应使抗肿瘤药物的临床应用难以达到满意的治疗预期,且随着化疗药物的应用,患者逐渐出现耐药[4],药物耐药性是肿瘤治疗中一个需要迫切解决的问题。中医药在临床中抗肿瘤治疗的效果得到了越来越多的认可,并且在临床治疗实践中发现其具有独特的临床优势。中药因其不良反应小等优势对于乳腺癌术后并发症及化疗不良反应有较好的疗效[5]。中药在乳腺癌治疗过程中发挥着不可替代的作用,寻找治疗效果好,不良反应小的中医药物质是现代医学的研究重点之一。槲皮素作为一种广泛存在的中草药黄酮类化合物,具有抗肿瘤、抗炎症、抗菌和保护心血管的作用[6]。研究表明,大鼠肉瘤蛋白(Rat Sarcoma,Ras)-加速纤维肉瘤蛋白(Rapidly Accelerated Fibrosarcoma,Raf)-丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activatedProtein Kinase,MAPK)-细胞外信号调节激酶(Extracellular Signal Regulated Kinase,ERK)信号通路在乳癌细胞的增殖、凋亡及分化过程中具有重要作用。此外,RAS/RAF/MEK/ERK信号通路可以减少血管生成因子的分泌,抑制乳腺癌前病变血管生成[7]。虽然已有研究表明槲皮素可以抑制乳腺癌细胞的增殖[8],但关于槲皮素作用于RAS/RAF/MEK1信号通路的具体机制相关研究较少。本研究对槲皮素抑制乳腺癌MCF-7细胞作用机制进行研究,探讨其与RAS/RAF/MEK1信号通路的关系,为槲皮素应用于临床提供更多的实验支持。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 乳腺癌MCF-7细胞由中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心提供(资源编号:1101HUM-PUMC000013)。

    1.1.2 药物 槲皮素购自北京索莱宝科技有限公司(批号:312C022,货号:SQ8030,纯度≥98%)。

    1.1.3 试剂与仪器 N/H/K-Ras抗体(Proteintech,美国,货号:HX16148);MEK1抗体(Proteintech,美国,货号:11049-1-AP);YAP1抗体(Proteintech,美国,货号:10176-2-AP);ER抗体(Proteintech,美国,货号:21244-1-AP);PR抗体(Proteintech,美国,货号:25871-1-AP);GAPDH(Proteintech,美国,货号:10494-1-AP);山羊抗兔IgG(H&L)二抗Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)(Proteintech,美国,货号:SA00001-2);二甲基亚砜(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BS087);DMEM培养液(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL304A);10%胎牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司,货号:11011-8611);青霉素(100 U/mL)链霉素(100 mg/mL)溶液(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL505A);蛋白酶抑制剂cocktail(北京索莱宝科技有限公司,货号:P6730);Annexin V-FITC/PI(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL110B);胰蛋白酶消化液(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL527A);4%多聚甲醛(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL539A);0.1%曲拉通(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BS084-500ml);RIPA细胞裂解液(北京索莱宝科技有限公司,货号:R0100);PBS缓冲液(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL302A);DAPI溶液(北京兰杰柯科技有限公司,货号:BL105B) ......