杜 玫 邢龙飞 胡庭尧 朱文婷 马薇薇 郭长青

    (北京中医药大学,北京,100029)

    膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是以膝关节疼痛、活动受限、肿胀、僵硬等为主要临床症状的骨关节疾病[1]。关节软骨是维持膝关节功能的重要因素,其正常的力学环境对维持关节的稳定性具有重要意义[2]。KOA发病机制复杂,生物力学因素是诱发KOA及其形成过程中的关键因素,膝关节力学的失衡导致局部关节软骨承受的应力异常,加剧软骨的磨损、疼痛,导致软骨退变诱发KOA[3]。在此过程中,软骨的化学成分、结构以及其他力学特征都发生显著变化,使得其液体承载能力和纤维的抗拉伸能力受到严重削弱,从而引起软骨变形、细胞凋亡以及纤维衰减[4-5]。由于关节软骨出现破坏,滑膜细胞、软骨细胞产生的炎症介质作用于神经元,引发疼痛[6]。研究表明,白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)在膝关节骨性关节炎疾病的发生发展中起着关键作用,作为炎症介质二者协同激活炎症信号通路后迅速传递信号,导致大量相关基因表达,增加炎症介质、趋化因子、黏附因子以及酶分泌,加重关节炎症和疼痛,导致关节软骨破坏程度加剧,加速KOA进程,最终对关节的功能产生不利影响[7]。因此,恢复膝关节软骨正常应力、抑制炎症介质释放是延缓软骨退变从而治疗KOA的有效方法。

    前期研究已证实,针刀“调筋”可有效调节肌肉-肌腱力学特性进而恢复关节良性应力环境,改善软骨组织合成和分解以缓解软骨退变,发挥针刀“治骨”的作用[8]。但针刀对膝关节软骨力学方面以及滑膜液炎症介质的直接影响尚不清楚。本研究意在通过观察针刀干预后膝关节、关节软骨应力变化、软骨形态学变化及炎症介质表达的变化,分析针刀干预对软骨受力、退变的影响,进一步探讨针刀治疗KOA的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 健康24周龄的清洁级新西兰雄性兔28只,体质量2.0～2.5 kg,分笼饲养,室温保持(20±2)℃,湿度为40%～60%,自然光线充足照射,标准饮食供给,自由摄食饮水,实验室定期进行紫外线消毒。实验场地由北京富龙腾飞实验动物研究院有限公司提供,合格证号：SYXK(京)2018-0041。本研究通过实验动物伦理委员会审批(伦理审批号：BUCM-4-2022010101-1097)。

    1.1.2 试剂与仪器 3%戊巴比妥钠溶液(Sigma,德国,货号：P1110);乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic Acid,EDTA)脱钙液(塞维尔公司,货号：G1105);苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染液套装(塞维尔公司,货号：G1003);磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)(塞维尔公司,货号：G0002);酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)试剂盒(南京建成生物工程研究有限公司,货号：CB10058-Rb、CB10011-Hs);一次性无菌针灸(苏州针灸用品有限公司,规格：0.2 mm×13 mm);韩氏穴位神经刺激仪(北京华卫,型号：LH202);一次性针刀(北京卓越华友医疗器械有限公司,规格：0.3 mm×30 mm);台式高速冷冻离心机[大龙兴创实验仪器(北京)股份公司,型号：D3024];酶标检测仪(BioTeK,美国,型号：Epoch);磁共振成像系统(飞利浦,日本,型号：Achieva3.0T) ......