陈 剑 ，武 华 ，陈春华

    (1.山西医科大学，山西太原 030001；2.山西医科大学第一医院普外科，山西太原 030001；3.江西省武宁县人民医院，江西武宁 332300)

    大肠癌动物模型是大肠癌实验研究的基础。动物模型的构建，不仅是研究肿瘤预防的重要基础，还可用于大肠癌发生、发展及治疗等方面的研究。利用二甲基肼(1,2-dimethylhydrazine，DMH)作为工具药诱导大鼠大肠癌，这种前致癌物为结直肠癌动态和治疗性研究提供大量的动物模型[1-4]。如果以应用二甲基肼为基础，增加其他致癌因素作用于大鼠可提高大肠癌的诱发率，将有效缩短造模周期并节约成本。本实验分别以二甲基肼诱导、环磷酰胺抑制免疫为基础，应用大肠癌细胞肠黏膜下注射，以建立一种成功率高且可靠的大肠癌动物模型。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂 二甲基肼(购自Sigma公司)分子量：133.2；颜色：灰白色，4℃避光保存。SW480大肠癌细胞株(山西医科大学生化教研室赠)，环磷酰胺200 mg/支(购自江苏恒瑞医药股份有限公司)。

    1.1.2 动物 4周龄Wistar大鼠60只，清洁级，近交系，雄性，购自山西医科大学动物中心。随机分成三组：二甲基肼组23只，环磷酰胺组23只，对照组14只，实验过程中出现死亡不计入实验。

    1.2 方法及处理

    1.2.1 细胞培养 人大肠癌细胞株SW480采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养，置37℃、5%CO2培养箱内培养，取生长状态良好的细胞，用0.25%胰酶消化后收集，以胎盘蓝检测细胞活性大于90%以上，加适量不含血清的RPMI 1640营养液配置成浓度为1×106个/ml的悬液备用。

    1.2.2 二甲基肼组 将二甲基肼用生理盐水配成1%溶液，用4%NaOH溶液调成pH值为6.5～7.0，抽滤除菌，大鼠颈部皮下注射，30 mg/kg，1次/周，每周测体重1次，据体重调整剂量，至第8周末，按文献[5]的方法取大肠癌细胞悬液0.2 ml注入背侧肛门缘上2 mm直肠黏膜下；对照组仅皮下注射二甲基肼8周。

    1.2.3 环磷酰胺组 取环磷酰胺用生理盐水配成10%溶液 ......