顾 靓，张阳德

    (中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心，湖南长沙 410008)

    RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响

    顾 靓，张阳德*

    (中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心，湖南长沙 410008)

    目的：探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞侵袭与转移的影响。方法：体外合成mTOR siRNA，并转染HepG2细胞24 h，同时设无义对照组(转染无义对照siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染)。采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达；应用Transwell小室细胞体外实验检测转染后肝癌HepG2细胞的穿膜细胞数，评价肝癌细胞体外侵袭和转移能力的变化。结果：mTOR siRNA转染组HepG2细胞mTOR蛋白的表达低于各对照组(P<0.05)；HepG2细胞侵袭和转移力均显著低于各对照组(P<0.05)。结论：mTOR siRNA可有效抑制HepG2细胞mTOR蛋白的表达，且能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移。

    原发性肝癌；HepG2细胞；mTOR；RNA干扰；HepG2细胞；侵袭；转移

    原发性肝癌是原发于肝细胞或肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤之一。肝癌起病隐匿，发展迅速，恶性程度高，一旦发现多为中晚期，不论是手术还是姑息治疗，效果均不理想。由于肝癌是一种高侵袭、高转移性癌症，临床治疗又易复发转移，使疗效难以提高。据统计，我国肝癌的死亡率在我国各种恶性肿瘤中高居第二位，占全部恶性肿瘤死亡人数的18.8%，每年有10万人以上死于肝癌[1-2]。因此，如何阻断癌细胞侵袭与转移，是目前肝癌研究的热点之一。本研究旨在研究RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭力的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    肝癌HepG2细胞系购自中国生命科学院细胞库，含高糖DMEM培养基和胎牛血清购自碧云天生物技术公司。RPMI-1640购自美国 Gibco公司。T7 RiboMAXTMExpress RNAi System试剂盒购自美国Promega公司。脂质体Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司。兔抗人mTOR单克隆抗体购自美国Cell Signaling公司。兔抗人actin单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。Transwell小室购自美国Corning公司。基质胶Matrigel购自美国BD Biosciences公司 ......