张金龙 ，王海娟 ，路 中 ，刘 健 ，林 晨 ，钱海利 *，李贵新 *

    1.潍坊医学院，山东潍坊 261053；2.北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室，北京 100021

    Oct4在多种人腺癌组织中表达水平的研究

    张金龙1，王海娟2，路 中1，刘 健2，林 晨2，钱海利2*，李贵新1*

    1.潍坊医学院，山东潍坊 261053；2.北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室，北京 100021

    目的：研究5种人腺癌中Oct4的表达情况，为进一步探索其在肿瘤发生中的机制提供基础。方法：应用乳腺癌、胃癌、胰腺癌、肠癌、子宫内膜癌5种腺癌的组织芯片，通过免疫组织化学染色研究Oct4蛋白在组织中的表达情况，并与癌旁正常组织进行比较。结果：Oct4在5种腺癌肿瘤组织内均有表达，胃癌组织内Oct4的表达高于癌旁正常组织(P1 材料与方法

    1.1 材料

    腺癌组织芯片临床病理资料：腺癌组织芯片由中国医学科学院肿瘤医院病理科吕宁教授提供。芯片共包含150例腺癌患者的组织样本，就诊时间为2002～2003年。乳腺癌、胃癌、胰腺癌、肠癌、子宫内膜癌各30例(芯片处理过程中有个别样本脱落现象，以获得实际结果的样本数为准)，每种系统肿瘤均包括5例癌旁组织。

    1.2 试剂

    兔抗人Oct4多克隆抗体(abcam，ab19857)，第二代通用型二步法检测系统(PV9000，北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 免疫组织化学染色步骤 采用免疫组织化学通用型二步法。PBS代替一抗作为阴性对照，山羊IgG按照5μg/m l稀释代替一抗作为同型对照，精原细胞瘤组织作为阳性对照。组织芯片常规脱蜡至水，EDTA抗原修复液(pH=8.0)行热修复，3%H2O2孵育30min，山羊血清封闭10 min。滴加Oct4(1∶250)4℃过夜，滴加增强剂室温孵育 25min，滴加二抗室温孵育25 min，DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，脱水，封片。镜检。

    1.3.2 免疫组织化学评分 Oct4在细胞核、细胞浆中均有表达，分别评分。评分标准如文献[4]所述，按阳性细胞数分为：阳性细胞数<5%为0分；阳性细胞数5%～25%为1分；阳性细胞数26%～50%为2分；阳性细胞数51%～75%为3分；阳性细胞数>75%为4分。按染色强度分为：基本未着色、着色与背景相似者为0分；着色浅略高于背景者为1分；中度着色、明显高于背景者为2分；强染、呈深棕色者为3分 ......