同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病大鼠的实验研究
胰岛,1材料与方法,1实验动物与试剂,2实验方法,3统计学方法,2结果,1三组大鼠血糖,HbA1c,胰岛素比较,2三组病理观察,3讨论
高 斌 ,宓 真,杜馨丽,车海龙辽宁省糖尿病治疗中心,辽宁沈阳 110015
糖尿病仍属终身疾病,传统药物治疗难以阻止胰岛β细 胞进行性衰竭,患者终身依靠胰岛素治疗亦不能阻止并发症的进展。近年来的细胞移植治疗,使得根治糖尿病有了新的曙光。骨髓间充质干细胞(BMSC)能定向诱导分化为胰岛素分泌细胞,易于获得及体外扩增,可以解决临床胰岛细胞供体缺乏难题,并且避免移植物免疫排斥反应、涉及的医学伦理学及法律问题[1]。但该研究尚处于初期阶段,仍有许多问题需要解决,本研究通过SD大鼠尾静脉注射重组腺病毒-绿色荧光蛋白(Ad-GFP)病毒感染的BMSC,从生化检测、病理及免疫组织化学观察等方面初步探讨了同种异体BMSC移植对糖尿病大鼠的作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物与试剂
1.1.1 实验动物 SD大鼠 (清洁级),24只, 体重150~200g,2个月龄,室温18~25℃,自然光照射,购自沈阳药科大学动物实验室。
1.1.2 主要试剂 链脲佐菌素(streptozotocin,STZ;美国 sigma公司产品),DMEM-F12培养液 (Gibcol), 胎牛清 (国产天津),Hanks液 (本实验室自己配制),消化液:0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA 混合液(1∶1);重组腺病毒 (Ad-GFP 上清):北京诺赛基因组研究中心有限公司提供,血糖(葡萄糖氧化酶法,德国 BIOSEN C-Line,Clinic),胰岛素(放免试剂盒由北京北方生物技术研究所提供),糖化血红蛋白 (HbA1c)测定:比色法,试剂盒为南京建成生物工程研究所提供。
1.2 实验方法
1.2.1 糖尿病模型建立和分组 大鼠禁食12 h(不禁水) ......
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