杨俊霞，杨惠超，王东江，潘志强

    1.徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室&江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室，江苏徐州 221000；2.北京金康驰医药投资有限公司，北京 100142；3.河北省临漳县人民医院胸外科，河北临漳 056600

    亲环蛋白A(CypA)是亲环蛋白家族主要成员，于1984年在哺乳动物细胞中首次被发现，是免疫抑制剂环孢酶素A(CyclosporinA,CsA)在细胞内的作用靶点[1]，具有肽基脯氨酸顺/反异构酶活性。研究显示，CypA在多种肿瘤细胞中高表达[2-6]，提示其与肿瘤的发生发展具有相关性。最近研究证实氧化应激和缺血时，CypA对神经元有保护作用[7-8]。

    以往的研究表明，银杏内酯(ginkgolides,Gin)对氧糖剥夺和过氧化氢损伤的神经元有良好的保护作用[9-12]，但其保护机制是否与CypA的表达有关尚未见报道。为此，本研究以过氧化氢损伤的皮层神经元为模型观察Gin对CypA表达的影响，为进一步证实在过氧化氢损伤时Gin与CypA表达的关系，本研究还采用了过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞模型，进一步证实了过氧化氢损伤时，Gin对细胞的保护作用与CypA表达的关系。

    1 材料与方法

    1.1 药品与试剂

    Gin(长沙上禾生物科技有限公司)、DMED培养基、Neurobasal Medium、B27(Gibco,USA)、胎牛血清(杭州四季青生物公司)、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物L-多聚赖氨酸、MTT、胰酶(Sigma,USA)、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、SDS、Tris(上海朝瑞生物技术公司进口分装)、PVDF 膜(Bio-Rad Laboratories,USA)、抗 β-actin单克隆抗体(Sigma公司)、抗CyPA多克隆抗体 (Biomol,USA)、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔 IgG(Cell Signaling Technology,USA)免疫印迹化学发光试剂 ECL(PIERCE)，Kodak 胶片(USA)，其余为国产分析纯试剂。

    1.2 过氧化氢损伤的皮层神经元模型的建立

    取胎龄为13～15 d的ICR小鼠，无菌条件下分离出大脑皮层，在D-Hank′s平衡盐溶液中漂洗3次，尽量剔除脑膜，剪碎后用终浓度为0.25%胰酶，37℃消化10 min，离心，弃去上清，用含15%胎牛血清的DMEM培养基制备成1.5×109cell/L密度的细胞悬液，接种于预先用L-多聚赖氨酸包被的培养板中 ......