孙 静，邵淑丽

    1.山西医科大学第二临床医学院，山西 太原 030001；2.山西省肿瘤医院妇科，山西 太原 030013

    卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，由于其早期症状不典型且较隐匿，较早就可发生转移和广泛播散，且目前仍缺乏早期有效的诊断技术，患者就诊时75%～85%皆已属临床晚期[1]，因而死亡率极高。近年来研究发现，信号传导和转录激 活 因 子3(signal transducer and activater of transcription，STAT3)信号转导通路在肿瘤的发生和发展中起重要作用[2]，特别是在促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡、促进侵袭转移及免疫逃逸方面的作用尤为重要[3-4]。正常的卵巢细胞里无STAT3活化，而在多种卵巢癌细胞株中发现STAT3呈过度激活表达，本研究利用RNA干扰技术，构建siRNA(Small interference RNA)-STAT3来沉默STAT3癌基因的表达，从而了解STAT3对卵巢癌细胞体外侵袭与转移影响，为卵巢癌的基因治疗探索一条新的途径。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    pSilencer2.1-U6-neo质粒购自Ambion公司，各种酶为大连Takara生物公司产品，STAT3单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，LipofectamineTM2000脂质体购自Invitrogen公司，Transwell小室购自美国Corning公司，Matrigel基质胶购自美国BD公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人正常卵巢细胞均采用含10%FBS的RPMI1640细胞培养基，常规培养于5%CO2的37℃温箱中，每隔2 d更换细胞培养液，当细胞养至80%～90%融合时，用0.25%胰酶消化传代。

    1.2.2 STAT3、siRNA转录模板的设计及合成[5]从GenBank中查找人STAT3基因的全长序列，根据siRNA的设计原则，设计STAT3特异寡核苷酸序列，在设计的寡核苷酸序列两端分别引入两个酶切位点，加入9个碱基对的茎环结构，3′末端加有转录终止序列TTTTT，以形成发夹状siRNA寡核苷酸链序列 ：STAT3 正 义 链 5′-GATCCATCCAGAGTCACTGGAAGTT TCAAGAGAAGTTCCAGTGA CTCTGGATTTTTTTGTCGACA-3′ ......