朱松雷，丁凤鸣，沈 策

    上海交通大学附属第六人民医院呼吸内科，上海 200233

    铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa，PA)是慢性呼吸道感染主要致病菌之一。它广泛分布于自然界并在人体皮肤上定植，是引起肺囊性纤维化 (CF)及弥漫性泛支气管炎(DPB)等慢性感染的最重要的病原菌，也是近年来院内感染的重要条件致病菌和耐药菌之一。树突状细胞(dendritic cells，DCs)是目前所知功能最强的且唯一能激活初始性T细胞的抗原提呈细胞。本研究通过建立铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型，观察小鼠肺部的病理学特点及肺脏DCs的变化及分泌细胞因子的应答能力，探讨肺脏DCs在慢性感染中的作用及其可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    选取健康雌性Balb/c小鼠54只，体重18～21 g，7～8周龄，由上海交通大学附属第六人民医院动物房提供。铜绿假单胞菌菌株ATCC27853，购于中国微生物中心。小鼠白介素23试剂盒购于R&D公司。CD11c一抗、CD11c SABC免疫组化试剂盒 (武汉博士德)，显微病理成像系统(OLYMBUS BX41)，CO2孵箱，烤箱，酶标仪，比浊仪。

    1.2 动物分组及模型制备

    将54只小鼠分为两组，PA组30只，经气管接种铜绿假单胞菌琼脂糖珠悬液；对照组24只，经气管接种无菌琼脂糖珠悬液。铜绿假单胞菌琼脂糖珠的制备，参照于柏峰等[1]的方法并稍作改良制备。接种微量PA琼脂糖珠悬液于去纤维羊血培养皿中培养，用比浊仪调整菌落计数至5×109cfu/ml。用氯胺酮麻醉小鼠，将PA组小鼠固定在专用手术台上，颈部前侧用眼科剪剪一0.5 cm的竖切口，用眼科镊剥离挑出气管，用1 ml注射器注入40 μl铜绿假单胞菌琼脂糖珠悬液。立即竖起小鼠轻轻摇晃，保持1 min，使菌液流下进入肺内，小鼠有类似呛咳反应。切开伤口不做处理，自然愈合。对照组给予同样方法注入无菌琼脂珠悬液。

    1.3 标本的采集及观察项目

    观察试验后两组小鼠的一般状况，分别于接种后l、3、7、14 d用氯胺酮麻醉小鼠，经腹主动脉放血，用1 ml注射器进行肺泡灌注，分3次，分别灌注0.8、0.5、0.5 ml无菌磷酸盐缓冲液(PBS) ......