食管癌放疗前后外周血癌胚抗原mRNA与蛋白检测的对比研究
1资料与方法,1一般资料,2试剂与仪器,3标本处理及RNA提取,4巢式RT-PCR,5统计学方法,2结果,1放疗前CEAmRNA,蛋白表达,2CEAmRNA,蛋白表达的临床病理联系,3CEAmRNA,蛋
薛金俊,袁 昕,殷旭东,汪 瑞,张正荣,夏广鑫江苏省扬州市第一人民医院肿瘤科,江苏扬州 225009
食管癌是我国高发恶性肿瘤之一,因早期症状不明显,大部分患者确诊时已属中晚期,如何提高食管癌早期诊断率和改善中晚期患者疗效是亟待解决的重要课题。研究表明,肿瘤细胞在其早期阶段就可能进入血液循环,而患者常无任何临床表现,常规检测手段亦不能发现,即肿瘤微转移(micrometastasis)[1]。 目前,循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)已成为肿瘤早期诊断、预后判断及疗效评估的重要手段[2]。 癌胚抗原(carcinogenic embryonic antigen,CEA)是一分子量为20万左右的糖蛋白,特异性地表达于上皮组织及其起源的肿瘤组织,而外周血中无上皮细胞,故可视为CTC标记[3]。本研究应用巢式RT-PCR技术检测72例根治性放疗食管癌患者外周血中CEA mRNA的表达,并与临床常用的血清CEA蛋白检测进行比较。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2008年3月~2009年3月在我院行根治性放疗食管鳞状细胞癌(ESCC)患者72例,其中,男54例,女18例;年龄46~83岁,中位年龄63岁;原发肿瘤部位:胸上段15例,胸中段46例,胸下段11例。根据放疗前影像学检查结果,依照我国《非手术治疗食管癌的临床分期标准(草案)》[4]分期:其中,Ⅰ期8例,Ⅱ期37例,Ⅲ期27例。入组条件符合以下标准:经胃镜病理检查确诊;均为初治患者;无放疗禁忌证;无远处转移;KPS评分≥70分;预计生存期≥3个月;实验室检查主要指标无异常。所有患者采用6 MV-X射线,2.0 Gy/次,5次/周,总剂量60~70 Gy,分30~35次完成放疗计划。放疗结束后采用RECIST实体瘤疗效标准进行评价[5],分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD),有效率=[(CR+PR)/总例数]×100%。
1.2 试剂与仪器
淋巴细胞分离液购自上海华精生物科技公司;Trizol细胞裂解液购自Invitrogen公司;RT-PCR试剂盒和DNA Marker购自Takara公司;基因引物由上海英骏生物技术公司合成;梯度PCR仪和分光光度计为Eppendorf公司产品;凝胶电泳成像系统为上海培清科技有限公司产品 ......
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