探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制
蛋白酶体,内分泌,空白对照,1材料与方法,1A549细胞和试剂,2细胞培养及处理,3MTT比色法检测细胞存活率,4蛋白免疫印迹(WesternBlot),5流式细胞仪检测细胞凋亡率,6统计学方法,2结果
朱 逸,贡 力,钮洪艳徐州医学院附属淮安市第二人民医院心胸外科,江苏淮安 223002
近几十年来,肺癌的发病率和死亡率不断升高。在1998~2002年,肺癌的发病率和死亡率在我国大多数地区居恶性肿瘤的首位[1];而在2002年肺癌的新病例和死亡人数在全世界也居恶性肿瘤首位[2]。肺癌的病理分型出现腺癌比例增加的趋势。在生物体内蛋白质进行选择性降解的重要途径之一是泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin proteasome pathway,简称UPP通路),它在调节细胞凋亡过程中的作用非常重要[3-4],在研究UPP在细胞凋亡中的作用时,蛋白酶体抑制剂(MG132)的应用为我们提供了有力的手段。有研究表明,蛋白酶体抑制剂能够诱导多种人肿瘤细胞的凋亡是通过阻断泛素化通路而实现,但其具体作用机制到目前仍未被阐明[5-6]。该研究应用体外培养的人肺腺癌细胞株A549,并且给予不同浓度的MG132处理,观察其对A549细胞凋亡率的影响,以及细胞内Bcl-2和Bad蛋白表达水平的变化。探讨MG132调控A549细胞凋亡的可能机制,为进一步研究MG132诱导A549凋亡的机制和其他类型肺癌以及其他肿瘤的作用提供参考。
1 材料与方法
1.1 A549细胞和试剂
人肺腺癌细胞株A549购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所。新生牛血清(NBS,杭州四季青生物工程材料研究所);RPMI-1640 培养基(Gibco公司);AnnexinVFITC/PI凋亡试剂盒(上海博蕴生物试剂有限公司);MG132、一抗 Bcl-2 和 Bad、MTT(Sigma公司)。
1.2 细胞培养及处理
将A549细胞常规复苏后 ......
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