顿文亮 ，周 玉，高运军，包贝华

    1.江苏省南京市中医院药剂科，江苏南京 210001；2.南京中医药大学药学院，江苏南京 210029

    茶碱是临床上最常用的平喘药之一，但茶碱的体内吸收和排泄个体差异很大，并且其有效范围窄，易产生副作用，因此监测茶碱血药浓度对临床治疗显得非常必要[1]。目前HPLC是最常用方法之一，满足临床需要，本实验结合文献[2]，建立了快速、准确、简便、经济、重现性好的茶碱血药浓度的HPLC检测方法。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器

    日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪，LC-10ADVP双泵，SPD-10Avp紫外检测器，LC solution色谱工作站，Ts 0.5/20型超声波电源，HP-01真空泵，1612-高速离心机，SK-1型快速混匀器，SC-230海尔冰箱，AL104电子天平。

    1.2 药品与试剂

    茶碱(购自中国药品生物制品检定所，批号：100121-199903)、咖啡因(购自中国药品生物制品检定所，批号：171215-200809，含量为99.9%)，甲醇为色谱纯，实验用水为超纯水经微孔滤膜过滤。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    色谱柱：Hypersil ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(25∶75)(V/V)；检测波长：274 nm；流速：1 ml/min；柱温：30℃。

    2.2 茶碱标准品溶液的制备

    精密称取茶碱标准品4.0 mg，甲醇溶解定容，配制成0.4 mg/ml的储备液，临用时用超纯水稀释到相应的浓度。

    2.3 内标溶液的制备

    精密称取咖啡因3.0 mg，加入甲醇超声溶解定容，配制成150 μg/ml的咖啡因溶液为内标。样品均4℃保存备用。

    2.4 血清样本的预处理

    取血清样本200 μl置入 1.5 ml离心管中，加入10 μl甲醇，再加入 150 μg/ml的内标物咖啡因储备液 10 μl，混匀振荡 10 s，加入甲醇 300 μl，混匀振荡 1 min，置 15000 r/min高速离心机离心10 min ......