宋 鹏，段蕴铀，黄友章，吴海波

    海军总医院质量管理科，北京 100048

    在临床上使用一种化疗药对肿瘤患者实施化疗后，治疗后的肿瘤细胞可同时对多种不同结构的其他抗癌药也产生耐药性，这种现象称为多药耐药(multi-drug resistance，MDR)。人类肿瘤细胞多药耐药的经典途径是由多药耐药基因(MDR1 Gene)转录出 MDR1 mRNA，再由 MDR1 mRNA 翻译的糖蛋白(P-gp)介导的[1]。这种ATP酶依赖的跨膜蛋白P-gp，有将天然来源的药物泵出细胞的功能，这可使细胞内的药物浓度降低而导致MDR[2]。临床上有时患者在外照射后对其后的化疗不再敏感，即外照射也表现出了MDR表型。本文主要是观察被照射的小细胞肺癌细胞系在外照射前后其总RNA、MDR1 mRNA、药物敏感性以及放射敏感性的变化，从而探讨多药耐药基因是否还有其他未被揭示的新作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    上海科学院细胞库购得NCI-H446小细胞肺癌细胞系。该细胞系的生物学性状参见文献[3]，其培养条件参见文献[4]。细胞生长进入指数期后进行实验。

    1.2 方法

    1.2.1 照射条件 采用中国核动力研究设计院实验工厂生产的GWGP80型远距离60Co治疗机，照射条件参见文献[4]。

    1.2.2 细胞的外照射 当NCI-H446细胞进入指数生长期后，用0.25%胰酶消化，并将吹匀的细胞悬液移入75 ml的细胞培养瓶中进行培养，等细胞贴壁并汇合后进行外照射，照射剂量为2 Gy/次(戈瑞，辐射吸收剂量单位)，中间恢复3 d，总的外照射剂量为50 Gy[5]。

    1.2.3 外照射前后NCI-H446细胞总RNA的提取 分别取照射前后的NCI-H446细胞约1×107个，用PBS将NCI-H446细胞冲洗2遍，离心后弃上清液，各加1 ml Gibco公司生产的Trizol，吹打使NCI-H446细胞溶解，用氯仿液抽提后，加入异丙醇沉淀，用70%乙醇洗涤，然后凉干，最后加0.1%DEPC水溶解总RNA。提取后的总RNA经紫外分光光度计260 nm定量。

    1.2.4 RT-PCR RT-PCR的详细过程参见参考文献[4]。

    1.3 不同浓度的丝裂霉素(MMC)对外照射前后两组细胞存活率的影响

    1.3.1 配制不同血浆峰浓度(PPC)的MMC 配制不同血浆峰浓度(PPC)的MMC的具体方法参见参考文献[6] ......