张学林 余秉翔

    1.解放军总医院呼吸科，北京 100853；2.解放军总医院国际医学中心，北京 100853

    siRNA(small interfering RNA)是一种双链小 RNA分子(长 21～25 bp)，是 RNA 干涉(RNAi)途径中的中间产物，是RNAi发挥效应所必需的因子，它通过与一系列特异性蛋白质结合形成RNA诱导的沉默复合物(RISC)，激发与之互补的目标mRNA的降解。siRNA对靶序列的作用具有高效性，在细胞内，siRNA能在低于反义核苷酸几个数量级的浓度下，使靶基因表达水平降低[1]。肺癌是目前全世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤[2]，按组织学分为小细胞肺癌(small-cell lung cancer，SCLC)和非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)，其中NSCLC占80%以上，我国肺癌五年生存率仅为8%～10%，65%的肺癌患者在诊断明确时已发展至晚期，失去手术机会[3]。化疗在肺癌治疗中具有极为重要的作用，铂类药物联合其他化疗药物目前仍是治疗NSCLC的主要方案。据统计，在我国以顺铂为主或含有顺铂联合用药的化疗方案占所有抗肿瘤化疗方案的70%～80%[4]。但是其严重的肾毒性、耳毒性及消化道损伤等药物蓄积性毒副反应制约着该药的临床应用[5]。为减少铂类药物的副作用，到目前已研发了许多铂类药物，但至今仍未找到一种满意的产品。为解决这一问题，本研究期望通过提高肿瘤对化疗药物的敏感性，在相同疗效甚至提高疗效的前提下减少化疗药物的用量，从而将毒副反应控制在较低水平。有研究表明，Bcl-2基因能抑制诸如抗肿瘤药等凋亡信号引起的细胞凋亡[6]。该基因的高表达与人肺腺癌细胞顺铂耐药关系密切[7]。本研究拟以人肺腺癌细胞A549为模型，通过siRNA技术降低肿瘤细胞中Bcl-2基因的表达，进而增加A549细胞对顺铂的敏感性，为减少顺铂剂量限制性毒副反应提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株

    人肺腺癌细胞株A549(ATCC)购于中国医学科学院肿瘤研究所，用含10%的胎牛血清(Hyclone)的RPMI-1640培养液加100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素，于37℃、5%CO2的孵箱中孵育。

    1.2 试剂与仪器

    注射用顺铂(冻干型)为齐鲁制药产品；jetPRIME转染试剂购于 PolyPlus-transfection 公司；Cell Counting Kit-8(CCK-8)购自DOJINDO公司；TRI Reagent购自Sigma公司；反转录试剂盒购于Promega公司；荧光PCR试剂购于TaKaRa公司；Bcl-2、GAPDH抗体购于Santa Cruz公司 ......