郭梦媛 皇甫辉 王丹丹 韩 瑞 李 卓 赵 轶

    山西医科大学第一临床附属医院耳鼻咽喉科，山西太原 030000

    喉鳞状细胞癌是呼吸道最常见的恶性肿瘤之一，大量研究显示趋化生长因子受体4(CXCR4)在某些肿瘤组织中有着过量的表达，通过SDF-1/CXCR反应轴控制肿瘤细胞迁徙和靶器官特异性表达[1-2]。而基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在趋化因子生物轴的下游激活途径中有其结合位点，从而促进磷酸化，使作用增强[3]。本文研究采用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CXCR4和MMP-13的蛋白及mRNA在喉鳞状细胞癌及其正常黏膜组织中的表达情况，探讨CXCR4和MMP-13在喉癌淋巴结转移中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 一般资料

    免疫组化方法选择我院耳鼻喉科2009年10月～2011年9月喉鳞癌切除后存档的蜡块，共70例，患者年龄为34～76岁，平均(56.7±6.7)岁，其中男 60 例，女 10 例；RT-PCR 方法选择2010年7月～2011年9月喉鳞癌切除后的新鲜组织，共 30 例，患者年龄为 36～72 岁，平均(55.9±6.2)岁，其中男25例，女5例。以上临床资料均完整，患者术前未接受放化疗。收集10例癌旁正常喉黏膜的新鲜组织做为对照组，一部分石蜡包埋用于免疫组化，另一部分置于灭菌的锡箔纸内，投入液氮罐内，随后放入深低温(-86℃)冰箱中保存，用于RT-PCR技术实验用。

    1.2 免疫组织化学方法

    CXCR4和MMP-13均以兔抗人多克隆抗体(武汉博士德生物技术有限责任公司)。实验严格按照试剂盒说明书操作。结果均由两位病理主治医师共同阅片得出。CXCR4和MMP-13蛋白均以细胞浆呈有棕黄色颗粒为阳性，每张切片观察5个具有代表性的高倍镜视野，根据染色部位的染色强度和染色细胞百分率进行评分：基本不着色为0分，着色淡者为1分，着色深者为2分；着色细胞占计数细胞百分率<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。将每张切片的着色强度得分和着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0～1分为阴性(-)，≥2分为阳性。

    1.3 RT-PCR方法

    采用Trizol试剂提取总RNA，引物设计应用primer 5.0软件，序列及合成的产物大小为：CXCR4上游：5′-CGGAA TTCCAGCAGGTAGCAAAGTGACG-3′ ......