不同培养基和促成熟组合对人外周血来源树突状细胞发育的影响
鸡尾酒,离心管,1材料与方法,2人外周血来源DC的体外培养方法,3统计学方法,2结果,1树突状细胞的培养形态,2树突状细胞的表型分析,3树突状细胞的细胞因子水平表达情况,3讨论
金 悦1,2,3 张 斌2,3▲ 陈 虎2,3▲1.解放军军医进修学院,北京 100853;2.军事医学科学院附属医院造血干细胞移植科,北京 100071;3.军事医学科学院细胞与基因治疗中心,北京 100071
树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前公认的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC),它能激活静止型T细胞,是启动、调控、维持免疫反应的中心环节,并在肿瘤、器官移植、感染等领域显示出免疫治疗的有效性。但人体内大部分DC处于非成熟状态,表达低水平的共刺激因子和黏附因子,体外激发同种混合淋巴细胞增殖反应的能力较低,成熟的DC表达高水平的共刺激因子和黏附因子,在成熟的过程中,由接触抗原的外周组织迁移进入次级淋巴器官,与T细胞接触并激发免疫应答。2011年,美国洛克菲勒大学教授、免疫学家Ralph MS因“发现树突状细胞及其在获得性免疫中的作用”获得诺贝尔生理学和医学奖。树突状细胞也因此再一次成为人们研究的焦点。DC在肿瘤、感染、器官移植等领域已显示出其免疫治疗的有效性及可行性,但体内DC数量极少,在外周血单个核细胞中所占比例低,故目前临床所用DC多是采集DC前体细胞后,经体外培养得到成熟DC细胞[1-2]。然而,人的DC培养体系不同,体外得到的DC数量也不同,DC的功能也有较大差异,因此,本课题组对比两种培养基和不同促成熟因子组合对人外周血来源DC发育的影响,旨在为优化人外周血来源DC培养体系奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂
淋巴细胞分离液(天津市灏洋生物制品科技有限责任公司,临床使用标准Cat LTS1077);重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human GM-CSF,rhGM-CSF),重组人白细胞介素(recombinant human interleukin,rhIL)-4,重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)购自美国PeproTech公司,重组人白细胞介素(recombinant human interleukin,rhIL)-1β,重组人白细胞介素(recombinant human interleukin,rhIL)-6购自美国 PeproTech 公司,前列腺素 E2(Prostaglandin E2,PGE2)购自美国Sigma公司;RPMI 1640细胞培养液购自某公司,CellGro无血清树突状细胞培养基购自A公司 ......
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